山梨醇脱氢酶检测试剂盒 ; 50T/48样
测定原理:
SDH催化山梨醇脱氢生成果糖,同时还原NAD+生成 NADH,测定340nm吸光度增加速率可以计算SDH活性。
仪器设备:
可调式移液器、水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计、石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成:
提取液:液体60ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体20ml×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前每瓶加入15ml蒸馏水,用不完的试剂仍4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入15ml 蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存。
操作步骤:
1、粗酶液提取:粗酶液提取详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。可用的总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。
2、操作表:
试剂
测定
试剂一(μl)
400
试剂二(μl)
300
试剂三(μl)
混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确水浴5min
样本(μl)
50
将上述树期表入1d有两比色三中,加样本用称计4时,证录20秒时的初始吸光度A1和2分钟20秒时的吸光度 A2,计算A=A2-A1。