羧酸酯酶(CarE)检测试剂盒 ; 50T/48样
测定原理:
羧酸酯酶能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固蓝显色,在450nm检测光吸收速率来监测萘酯生成速率,从而计算CarE活性。
自备仪器用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器枪、1ml 玻璃比色皿、无水乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制:
未开封产品3个月内有效
试剂一:液体50ml×1瓶,4℃保存
试剂二:液体30ml×2瓶,4℃保存
试剂三:粉剂×2支,4℃保存,临用前取1支试剂三加1.2ml 无水乙醇充分溶解
试剂四:粉剂×2支,-20℃保存
工作液配制:临用前取试剂二1瓶,取少量试剂二加入到1支试剂四中溶解,然后把溶解的1支试剂四和1支试剂三加入到该瓶试剂二中,混匀充分,过滤,4℃避光保存,可用1周。
样本前处理:
样本提取详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。可用的总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min以上,调节波长到 450nm,用蒸馏水调零。
2、工作液在 37℃中预热 30min以上。
3、空白管:依次在1ml玻璃比色皿中依次加入5μl蒸馏水,1000μl预热的工作液,迅速混匀后在 450nm测定 10s 和190s光吸收 A1和 A2,△A 空白管=A2-A1。注意:空白管只需做 1-2 次。
4、测定管:依次在 1ml 玻璃比色皿中依次加入5μl 上清液,1000μl 预热的工作液,迅速混匀后在450nm测定10s和190s光吸收 A3和A4 ,A测定管=A4-A3。