土壤脲酶(UE)检测试剂盒 ; 50T/24样
测定原理:
脲酶是一种高度专性的酶,能酶促尿素的水解,其反应式如下:
由此可以测定氨的量。NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应,生成水溶性染料靛酚蓝,其深浅与溶液中的NH4+–N含量呈正比,线性范围为0.05~0.5mg/L之间。靛酚蓝反应原理如下:NH3 + OCl——NH2 Cl +OH –
试剂盒组成:
试剂编号
试剂名称
试剂装量
试剂配制与保存条件
试剂一
客户自备
试剂二
底物液
15mL×1瓶
4℃保存
试剂三
缓冲液
60mL×1瓶
试剂四
基质A液
2mL×1瓶
基质B液
试剂四基质应用液的配制:把A液:B液:蒸馏水按1:1:3的比例混合,现用现配
试剂五
显色液
5mL×1瓶
试剂六
240ug/ml氮标准溶液
5mL×1支
自备仪器:
可见光分光光度计、台式离心机、可调移液器、电子秤、漩涡混匀器、水浴锅(或恒温箱)、一次性试管(或2ml离心管)。
操作步骤:
1、培养反应:
测定管
对照管
风干土样(g)
0.2
试剂一甲苯(ul)
100
震荡混匀,使土样全部湿润,室温静置15min
试剂二底物液(ul)
500
蒸馏水(ul)
试剂三缓冲液(ul)
1000
混匀,37℃孵育24h后,混匀,10000转/min常温离心10min,取上清液备用。
2、将上清液用蒸馏水10 倍稀释后,待测(或可取 0.1ml 加水 0.9ml 稀释)
3、显色反应:
标准管
稀释后的上清液(ul)
400
-
不同浓度的氮标准液(ul)
试剂四基质应用液(ul)
80
试剂五显色液(ul)
60
混匀,室温静置 20min
蒸馏(ul)
460
混匀,波长578nm ,1cm光径,蒸馏水调零,测定各管吸光度值。