微量丙二醛(MDA)检测试剂盒 ; 50管/24样
本试剂盒是在原MDA试剂盒针对一些含量较少的样本（比如培养细胞及细胞上清）测试效果不是太好的的基础上改进的一种更为灵敏、简便的测试方法。
测定意义：
机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fattyacid ，PUFA）， 引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。
因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。
氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸（PUFA）的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试 MDA 的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。
MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过 SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。
测试原理：
过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物,在532nm处有最大吸收峰。因底物为硫代巴比妥酸（Thibabituric AcidTBA）所以此法称TBA法。
测试所需仪器设备：
可见光分光光度计，可调到 95℃左右的恒温水浴箱或沸水浴锅，离心机。
试剂盒组成与配制：
试剂一：液体10ml×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体6ml×1瓶，用时加170ml双蒸水混匀，4℃冷藏。（注意不要碰到皮肤上）。
试剂三：粉剂×1支，用时将粉剂加入到 90℃~100℃的热双蒸水30ml中，(在溶解过程中可适当加热)，充分溶解后用双蒸水补足至30ml再加冰醋酸 30ml，混匀，配好的试剂避光室温保存。
(注：冰醋酸自备）
标准品：10nmol/ml四乙氧基丙烷 5ml×1瓶，4℃冷藏。
［注］：冰醋酸（分析纯，乙酸浓度≥99.5%）;测试盒冷藏至少可保存一年。
规范操作方法：
1、操作表：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管** |
10nmol/ml标准品(ml) | | a* | | |
无水乙醇(ml） | a* | | | |
测试样品(ml） | | | a* | a* |
试剂一(ml） | a* | a* | a* | a* |
混匀（摇动几下试管架） |
试剂二(ml） | 3 | 3 | 3 | 3 |
试剂三(ml） | 1 | 1 | 1 | |
50%冰醋酸(ml） | | | | 1 |
旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴（或用锅开盖煮沸）40分钟，取出后流水冷却， 532nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。a*表示所取的样品量、标准品量、无水乙醇的量、试剂一的量，四者均相等。例如样品取0.1ml则标准品、无水乙醇、试剂一也取0.1ml，若样品取0.2ml则标准品、无水乙醇及试剂一也取0.2ml。因吸光度与加样量呈正比曲线，因而结果不受影响。**对照管每个样本都需要做。
2、参考取样量：血清（浆）取 0.1～0.2ml。低密度脂蛋白悬液取0.1～0.2ml。细胞悬液及细胞上清取 0.1～0.2ml。
3、规范操作方法标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则标准管吸光度减去空白管的吸光度为0.065～0.070。当标准品取样量为0.2ml时，则标准管吸光度减去空白管的吸光度为0.130～0.140。
4、规范操作方法及简便操作方法中，若发现检测样本吸光度太低，可以将水浴时间40 分钟延长至80分钟，但您的同一课题中MDA的检测都必须延长至80分钟，以免造成批间差异。
简便操作方法：
1、混合试剂的配制：
工作液Ⅰ的配制:试剂一:试剂二:试剂三= a*:3:1,用多少配多少,配好后当天测定
工作液Ⅱ的配制:试剂一:试剂二: 50%冰醋酸= a*:3:1,用多少配多少,配好后当天测定
注: a*表示与样本的取样量相同,单位为毫升(ml)
2 、简便操作表：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管** |
10nmol/ml标准品(ml) | | a* | | |
无水乙醇(ml） | a* | | | |
测试样品(ml） | | | a* | a* |
测定管混合试剂(ml） | 4 | 4 | 4 | |
对照管混合试剂(ml） | | | | 4 |
旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴（或用锅开盖煮沸）40分钟，取出后流水冷却，532nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。
a*表示所取的样品量、标准品量、无水乙醇的量、试剂一的量，四者均相等。例如样品取0.1ml则标准品、无水乙醇、试剂一也取0.1ml，若样品取0.2ml 则标准品、无水乙醇及试剂一也取0.2ml。因吸光度与加样量呈正比曲线，因而结果不受影响。
**对照管每个样本都需要做。
注 1 ：以上规范操作法及简便操作法适用于人及各种动植物的样本（包括血清、动植物组织及体液、细胞及细胞培养液等）。
注 2 ：规范操作方法及简便操作方法中，若发现检测样本吸光度太低，可以将水浴时间 40分钟延长至80分钟，但您的同一课题中MDA的检测都必须延长至80分钟，以免造成批间差异。
注意点：
1、试管要刷洗干净，尤其测微量样品时更为重要。
2、配制试剂时要充分混匀。测试过程中第一管吸的试剂要丢弃，加样品或试剂时要垂直加，不要加在管壁上。95℃水浴前要充分混匀。
3、水浴时间及温度要固定。没有水浴锅的单位可用铝锅、铝盒、铝盆等开盖煮沸即可。
4、高脂样本操作时，离心沉淀一定要充分，否则影响吸光度，造成结果不稳定。这种情况可增加离心转速（3000转/分以上）或者延长离心时间使沉淀完全。
5、冬天若发现测试溶液呈雾状可以轻轻放水浴箱稍稍加温，待溶液溶解呈透明状态用移液
器吸取放入比色杯中，若仍然呈雾状，则考虑为高脂血症。
6、样本取样量：若您的样量较多，取样量可以加倍，抽提过程中，双蒸水、无水乙醇、
氯仿均要加倍。若您的样本为贫血病人的血样，则取样量也要加倍，抽提过程中，双蒸水、无水乙醇、氯仿的量则不变。
7、95℃水浴时最好用带盖的试管，以免反应液的蒸发。若没有带盖的试管可用冰箱保鲜膜盖好，用橡皮筋扎好后在保鲜膜上用针刺一小孔即可代替盖子。
本试剂盒优点：
1、本试剂盒中试剂均无刺激性气味，对操作人员无任何毒害。
2、快速准确，操作简便，每小时可测100例以上样本。
3、灵敏度高，血清或血浆样品只需0.1ml,或者更少。
4、再现性好，变异系数CV=2.0%，同一份标本数次测试结果相差极微。
5、呈色稳定，呈色后半天内测吸光度不变。
6、试剂稳定，保质期一年；试剂三配制后避光室温保存至少3个月（颜色变成咖啡色即不可使用）。
7、血清样品放置 4℃, 3～5天内测试结果不变。-70℃以下可保存3个月至半年。
8、测试面广，可测血清（浆）、各种组织匀浆，培养细胞等。
9、主要原料均为进口，但价格适中。
10、不需昂贵与特殊仪器，只需恒温水浴箱或者铝锅、铝盆开盖煮沸，及721、722 、751、752分光光度计任一型号均可。
11、不受气温等外界因素的影响。是目前国内最稳定的MDA测试方法。
