维生素E(Vitamin E)检测试剂盒 ; 50管/48样
试剂组成及配制：
| 试剂组成 | 50T/48样 | 保存条件 |
试剂一 | 粉剂 | 粉剂×1支 | 2～8℃避光保存 |
试剂一应用液的配制：溶于6.5ml无水乙醇中，避光保存，此粉剂较难溶解，需要提前3～4小时配制，使用前一定要确定粉剂完全溶解。 |
试剂二 | 粉剂 | 粉剂×1支 | 2～8℃避光保存 |
试剂二贮备液配制：溶于25ml无水乙醇配成贮备液避光保存。试剂二应用液配制：取试剂二贮备液用无水乙醇10倍稀释，应用液2～8保存不可超过2天。 |
试剂三 | 液体 | 5ml×1瓶 | 2～8℃保存 |
试剂四 | 组成匀浆介质 | 100ml×1瓶 | 2～8℃保存 |
试剂五 | 1mg/ml标准贮备液 | 0.6ml×1支 | 2～8℃保存 |
12μg/mlVE标准应用液配制：取1mg/ml的VE标准品贮备液0.12ml加无水乙醇定容至 10ml，即为12g/ml的VE标准品应用液。
[ 注 ] ：2～8℃密封保存，有效期3个月。
适用范围：
本试剂盒适用于检测动物血清（浆）、组织和植物等中VE的含量。
操作步骤：
(一)、血清（浆）中维生素E的测定：
1、血清（浆）正庚烷维生素E的抽提：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
血清(浆）(ml） | | | 0.1 |
双蒸水(ml） | 0.4 | 0.3 | 0.3 |
12µg/ml VE标准品(ml） | | 0.1 | |
无水乙醇(ml） | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
漩涡混匀20秒（蛋白沉淀） |
正庚烷(ml） | 1.2 | 1.2 | 1.2 |
旋涡混匀（充分抽提）1 分钟，然后3000～4000转/分，离心5～10分钟。
[ 注 ] ：观察试管内液分为三层，最上层为正庚烷维生素E抽提液，第二层为水及无水乙醇，最下层为蛋白沉淀物。
2、显色反应：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
VE正庚烷抽提液(ml） | 0.8 | 0.8 | 0.8 |
试剂一(ml） | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
试剂二(ml） | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
混匀，立即记录时间，准确静置 5 分钟 |
试剂三(ml） | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
混匀（10 秒左右） |
无水乙醇(ml） | 1 | 1 | 1 |
混匀，静置2分钟后，533nm处，1cm光径比色皿，无水乙醇调零，测各管吸光度值。 |
(二)、组织中维生素E的测定：
1、样本前处理：
10%组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（ml）=1：9的比例加入试剂四组织匀浆介质，冰水浴条件下匀浆，2500转/分离心10分，取上清待测。
2、组织匀浆中正庚烷维生素E的抽提：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
10%匀浆上清液(ml） | | | 0.4 |
双蒸水(ml） | 0.7 | 0.6 | 0.3 |
试剂二(ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀，立即记录时间，准确静置5分钟 |
试剂三(ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀（10秒左右） |
无水乙醇(ml） | 1 | 1 | 1 |
漩涡混匀20秒（蛋白沉淀） |
正庚烷(ml） | 1.2 | 1.2 | 1.2 |
旋涡混匀（充分抽提）1分钟，然后3000～4000转/分，离心5～10分钟。
[ 注 ] ：观察试管内液分为三层，最上层为正庚烷维生素E 抽提液，第二层为水及无水乙醇，最下层为蛋白沉淀物。
3、显色反应：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
VE正庚烷抽提液(ml） | 0.8 | 0.8 | 0.8 |
试剂一(ml） | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
试剂二(ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀，立即记录时间，准确静置5分钟 |
试剂三(ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀（10秒左右） |
无水乙醇(ml） | 1 | 1 | 1 |
混匀，静置2分钟后，533nm处，1cm光径比色皿，无水乙醇调零，测各管吸光度值。 |
测定意义：
维生素E（VE）是天然脂溶性抗氧化剂，它存在细胞膜性结构中（细胞膜、线粒体、微粒体）以及脂肪细胞的脂滴和循环的脂蛋白中。
VE不但是单线态氧和超氧阴离子自由基的清除剂，更重要的是脂质过氧化作用的阻断剂。从细胞水平的许多实验说明维生素E和 SoGSHPX 协同地保护细胞免受脂质过氧化损伤。VE 尚能直接与蛋白硫自由基偶联，使蛋白巯基恢复活性,VE也可通过清除LOO间接地防止蛋白巯基丧失。而蛋白巯基是维护细胞生存的重要环节，因而 VE是机体抗氧化的第一道防线。当维生素E缺乏时,机体易受到自由基的攻击而表现出各种病理状态。例如：老年性白内障、早衰等。
测定原理：
VE在菲罗啉的存在下，可使三价铁离子还原成二价铁离子，后者在特定的环境下可与菲罗啉形成粉红色复合物，通过比色，在标准曲线上可查出VE的含量，或者通过公式可计算出VE的含量。
注意事项：
1、试管要用肥皂粉或洗涤净煮开刷洗，再用自来水冲洗干净后双蒸水冲洗一遍。
2、2号试剂应用液最好当天配制，需多少配多少。
3、显色时间5分钟，要准确。
4、维生素E的抽提时间1分钟要充分。
5、因本法为微量测定，故每换一次移液尖，首次吸液要丢弃，以后每次加样或加试剂均要垂直滴入，切勿加在管壁上。
6、吸取正庚烷抽提液时，一定要小心吸取，不可将第二层（即水与无水乙醇液相层）混入，否则会影响吸光值。
7、显色所用试管要干燥。
8、本试剂盒仅用于科研、实验室。
