纤维素酶(CL)检测试剂盒 ; 50T/24样
功能
规格
保存
试剂一
缓冲液
液体，60ml×1瓶
4～8℃
试剂二
底物液
液体，15ml×1瓶
试剂三
显色液
液体，10ml×1瓶
避光 4～8℃
*试剂四
2mg/ml葡萄糖标准品
液体，1ml×1支
样本前处理：
样本提取详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。可用的总蛋白定量测试盒（考马斯亮蓝法）或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
操作步骤：
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加100ml蒸馏水，充分溶解。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
工作液配制：戴一次性手套小心打开试剂三瓶盖，加试剂二50ml充分溶解，4℃避光可保存一周。
1、酶促反应：
测定管
对照管
匀浆上清(ul）
50
-
煮沸的匀浆上清(ul）
试剂一(ul）
试剂二(ul）
200
蒸馏水(ul）
混匀，37℃孵育30min后，立即取出放入沸水浴中煮沸 15min，取出流水冷却，4000 转/分钟常温离心10min，制备糖化液上清。
2、显色反应：
空白管
标准管
糖化液上清(ul）
2mg/ml葡萄糖标准液(ul）
试剂三(ul）
150
混匀，沸水浴反应 15min，取出流水冷却
1000
混匀，波长550nm，1cm光径，双蒸水调零，测定各管OD值
测定原理：
纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成棕红色的氨基化合物，在550nm波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其还原糖生成的量即可测定纤维素酶的活力。
