线粒体呼吸链复合物II(Complex II)检测试剂盒 ; 20管/20样
反应原理：
线粒体 呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸 －辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（ Succinate-Coenzyme Q Reductase ；Succinate Dehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide ；FAD） 和三个铁硫中心（ Fe-S clusters），以及细胞色素 b 亚单位，其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶 Q 还原酶。
复合物 II 催化琥珀酸（succinate）被氧化为富马酸（fumarate），线粒体内电子由供体 FAD 传递到内膜上辅酶 Q 受体（泛醌 ；ubiquinone ） 的能量转移反应 ，进行 呼吸链传递 。该酶异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma）和 Leigh 综合征。
基于琥珀酸底物 ，通过琥珀酸 －辅酶 Q 还原酶 的催化 ，氧化为 富马酸 ， 同 时氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）转化为还原型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH2），在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（600nm 波长），由此定量测定琥珀酸－辅酶 Q 还原酶的特异活性。其反应系统是：
Complex II
SUCCINATE + DCPIP+CoQ → FUMARATE + DCPIPH2+CoQH2
蓝色 无色
↑Abs600nm ↓Abs600nm
试剂组成：
缓冲液(Reagent A） | 20毫升 |
反应液(Reagent B） | 2.5毫升 |
阴性液(Reagent C） | 2毫升 |
底物液(Reagent D） | 500微升 |
产品说明书 | 1 份 |
保存方式：
-20℃冰箱保存，避免反复冻融；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D），避免光照，有效期6月。
用户自备：
比色皿：用于比色分析的容器
双波长分光光度仪：用于比色分析
培养箱：用于孵育反应物
实验步骤：
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；缓冲液（Reagent A）室温预热；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D）注意避光。然后进行下列操作。
(一)、背景对照测定
1、移取780微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入100微升反应液（Reagent B）
3、加入20微升底物液（Reagent D）
4、上下倾倒数次，混匀
5、放进 30℃培养箱里静置3 分钟
6、加入100微升阴性液（Reagent C）
7、上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8、即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或 5分钟
(二)、样品活性测定
1、移取780微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入100微升反应液（Reagent B）
3、加入20微升底物液（Reagent D）
4、上下倾倒数次，混匀
5、放进30℃培养箱里静置3分钟
6、加入100微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）
7、上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8、即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：600波长读数0分钟－600波长读数1分钟或 5分钟
样品活性计算：
(样本读数-背景读数)×体系容量（1ml)×样本稀释倍数÷样本蛋白浓度样本容量(0.1ml） ×21.8 （毫摩尔吸光系数)×反应时间（1或者5分钟)（mgprot/ml）单位：μmol DCPIP /min/mgprot（蛋白浓度可通过总蛋白定量考马斯亮蓝法试剂盒测定）
