线粒体呼吸链复合物IV(Complex IV)检测试剂盒 ; 20管/20样
反应原理：
线粒体呼吸链复合物IV （ Mitochondria Complex IV），又称为细胞色素 C 氧化还原酶（ cytochrome c oxidoreductase）或细胞色素 C 氧化酶（Cytochrome c oxidase），存在于真核生物的细胞线粒体上，主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。呼吸链复合物 IV 是由 13 种不同的亚体构成的复合物，其中含有 2 个血红素（heme）基团（a和a3）和 2个铜原子，作为辅基（prosthetic groups）。
呼吸链复合物 IV 的遗传变异导致氧化磷酸化类疾病，包括阿茨罕默综合症和肿瘤等。基于底物还原型细胞色素 C（ reduced cytochrome c），受到呼吸链复合物 IV的催化 ，转化为氧化型细胞色素 C（ oxidized cytochrome c），在分光光度仪下，出现吸光值的变化（550nm波长），由此定量测定呼吸链复合物 IV 的活性。呼吸链复合物 IV反应系统为：
Complex IV
4 cytochrome c2＋ + 8H+ + O2 → 4 cytochrome c3+ + 2H2O + 4H+
reduced oxidized
↑Abs 550 nm ↓Abs 550 nm
试剂组成：
缓冲液(Reagent A） | 20毫升 |
反应液(Reagent B） | 2毫升 |
稀释液(Reagent C） | 1毫升 |
稳定液A(Reagent D1） | 1管 |
稳定液B(Reagent D2） | 250微升 |
产品说明书 | 1份 |
保存方式：缓冲液（Reagent A）和稀释液（Reagent C）保存在 4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent B）避免光照；有效保证6月。
用户自备：
比色皿：用于比色分析的容双波长分光光度仪：用于比色分析
培养箱：用于孵育反应物1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器
培养箱：用于孵育反应物
1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器
实验步骤：
(一)、背景对照测定
1、移取800微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入100微升稀释液（Reagent C）
3、上下倾倒数次，混匀
4、室温静置3分钟
5、加入100微升含有反应液（Reagent B）和稳定液（Reagent D）的工作液
6、上下倾倒数次，混匀（限定在3 秒之内）
7、即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：（0 秒读数－60 秒读数），正常读数差值为 0.001 至 0.005
(二)、样品活性测定
1、移取800微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入100微升待测样品（注意：建议总量2 微克线粒体蛋白）
3、上下倾倒数次，混匀
4、室温静置3 分钟
5、加入100微升含有反应液（Reagent B）和稳定液（Reagent D）的工作液
6、上下倾倒数次，混匀（限定在3 秒之内）
7、即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：（0 秒读数－60 秒读数），正常读数差值为正值
样品活性计算：
(样本读数 - 背景读数）×体系容量(1ml）×样本稀释倍数÷样本蛋白浓度样本容量(0.1ml）×21.84(毫摩尔吸光系数）×反应时间(1或者5分钟）(mgprot/ml）单位：μmol细胞色素 C /min/mgprot(蛋白浓度可通过总蛋白定量考马斯亮蓝法试剂盒测定）
