一氧化氮(NO)检测试剂盒/96T
测定意义及原理：
一氧化氮 NO（即血管内皮舒张因子），在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节脑血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO产生异常与某些疾病的发生发展有着密切关系。因此，近年来对NO的研究越来越受到广大医学科学工作者的重视。NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐及亚硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
试剂组成及配制：
前处理试剂：
试剂一：液体20ml×1瓶，4℃保存一年。
试剂二：液体10ml×1瓶，4℃保存一年。
显色试剂：
试剂三：液体10ml×1瓶，4℃避光保存。
(过饱和溶液,如有结晶析出，60℃以上加热溶解完全以后使用）
试剂四：液体3ml×1瓶，4℃避光保存。
试剂五：液体3ml×1瓶，4℃保存。
显色剂的配制：试剂三：试剂四：试剂五=2.5 : 1 : 1，现用现配，配好的显色剂放冰箱保存，颜色变得很深后不可再用。
20μmol/L亚硝酸钠标准液：2ml×1支；2mmol/L亚硝酸钠标准液：1ml×1支，4℃保存。
操作步骤：
1、前处理:
血清(浆): 取血清（浆）原液100μl加试剂一200μl,混匀，加试剂二100μl,漩涡充分混匀后静置10分钟，3500～4000转/分钟，离心15分钟，取上清液160μl操作。组织: 取10%匀浆上清 300μl加试剂一 200μl,混匀，加试剂二100μl, 漩涡充分混匀后静置10分钟，3500～4000 转/分钟，离心15分钟，取上清液160μl操作。
2、操作表:
| 空白孔 | 标准孔 | 测定孔 |
双蒸水(ml） | 0.16 | | |
20μmol/L亚硝酸钠标准液(ml） | | 0.16 | |
上清液(ml） | | | 0.16 |
显色剂(ml） | 0.08 | 0.08 | 0.08 |
混匀，静置15分钟，波长550nm，酶标仪测定各孔吸光度OD值。 |
技术参数：
项目序号 | 指标名称 | 指标要求 |
1 | 试剂盒检出限 | 0.2μmol/L |
2 | 试剂盒批内CV | 2.11% |
3 | 试剂盒批间CV | 5.65% |
4 | 试剂盒回收率 | 99.5% |
5 | 线性范围0.2～50μmol/L | R2=0.999 |
6 | 波长选择范围 | 530nm～570nm |
操作注意点:
1、严格按照操作规程。
2、离心后的上层液一定要澄清，若有混浊要再次离心。
3、溶血及混浊血清对测定结果有影响。
4、 血清及组织块-20℃冷冻后可保存1～2个月。温度越低保存时间越长。零上 4～5℃保存三天。
5、培养液的测定参照血清（浆）的操作及计算。
附录Ⅰ:标准曲线制备：
1、前处理：
用双蒸水将2mmol/L亚硝酸钠标准液进行:1:39、1:79、1 ：99、1:159、1:319、1:639 稀释。
即亚硝酸钠标准液浓度依次为：0.05mmol/L、0.025mmol/L、0.02mmol/L、 0.0125mmol/L、0.00625mmol/L、0.003125mmol/L
2、操作表：
| 空白孔 | 标准孔 |
双蒸水(ml） | 0.16 | |
不同浓度亚硝酸钠标准液(ml） | | 0.16 |
显色剂(ml） | 0.08 | 0.08 |
混匀，静置15分钟，波长550nm，酶标仪测定各孔吸光度OD值 |
3、测定结果
标准品浓度(μmol/L） | 测定OD值 | 绝对OD值 |
0 | 0.0406 | 0 |
3.125 | 0.0975 | 0.0569 |
6.25 | 0.1581 | 0.1175 |
12.5 | 0.2766 | 0.2360 |
20 | 0.4117 | 0.3711 |
25 | 0.4957 | 0.4551 |
50 | 0.9523 | 0.9117 |
4、绘制图表：
