中性转化酶(NI)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase ，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH ，将高等植物 Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。NI 主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
测定原理：
NI 催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算 NI 活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤和加样表：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 50 | 50 |
试剂一 | | 200 |
试剂二 | 200 | |
混匀， 37℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） |
试剂三 | 125 | 125 |
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96孔板中， 510nm 处记录各管吸光值 A ，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。 |
NI 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度(μg/mL)，y为吸光值。
(1) 按蛋白浓度计算
单位的定义：
37℃每mg蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性(μg/min/mgprot)＝[(ΔA +0.001)÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr)÷T=20.8×(ΔA +0.001)÷Cpr
(2) 按鲜重计算
单位的定义：
37℃每g组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性(μg /min/g鲜重)＝[(ΔA +0.001)÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=20.8×(ΔA +0.001)÷WV1：加入反应体系中样本体积，
0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y =0.0008x -0.001；x为标准品浓度(μg/mL)，y为吸光值。
(1) 按蛋白浓度计算
单位的定义：
37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性(μg/min/mgprot)＝[(ΔA +0.001)÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr )÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2) 按鲜重计算
单位的定义：
37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
NI 活性(μg/min /g鲜重)＝[(ΔA +0.001)÷0.0008×V1]÷(W×V1÷V2)÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷WV1 ：加入反应体系中样本体
积，0.05mL；V2 ：加入提取液体积，1mL；T：反应 时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本鲜重，g。
