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乙酰胆碱酯酶(A-CHE)检测试剂盒 ; 50管/24样

乙酰胆碱酯酶(A-CHE)检测试剂盒 ; 50管/24样

  • 货号:YJ49258
  • 可售卖地:全国
  • 供货:现货供应
  • 保 质 期:半年
  • 品牌:源桔生物
  • 保存温度:2-8℃
  • 检测方法:比色法
  • 分类:氧化与抗氧化系列
  • 规格:50管/24样
  • 用途:仅供科研使用
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源桔生物 YJ49258 50管/24样 ¥748 大量 液体盒装
  • 商品详情

乙酰胆碱酯酶(A-CHE)检测试剂盒 ; 50管/24样

测定原理: 

乙酰胆碱酯酶(Acetyl choline esterase)水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸,胆碱可以与巯基显色剂反应生成 TNB (对称三硝基苯,Sym-Trinitrobenzene)黄色化合物,根据颜色深浅进行比色定量,水解产物胆碱的数量可反应胆碱酯酶的活力。

试剂组成及配制: 

试剂一:标准品,粉剂×3支,4℃保存 6个月。 1mol/ml

标准品应用液配制:取标准品一支加生理盐水10ml混匀,现用现配。

试剂二:底物,粉剂×2支,4℃保存 6个月。

底物缓冲液配制:用时每支粉剂加生理盐水 20ml,制备成底物缓冲液,4℃保存两周。

试剂三:显色剂贮备液,3ml×1支,4℃保存 6个月。

显色应用液配制:用时按照显色剂贮备液:生理盐水=1︰9稀释,配成显色应用液。按需配制,也可一次配制30ml,避光冷藏3个月。

试剂四:抑制剂,液体 2ml ×1支。打开后装在空的小塑料瓶内(附空瓶一只),室温保存6个月。

试剂五:透明剂,液体6ml×1支,室温保存6个月。天冷时会有沉淀或混浊,须在37℃水浴加热至透明后方可使用。

生理盐水:60ml×2瓶,室温保存6个月。

操作过程:

1、样品前处理:

组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500  转/分,离心10分钟,取上清液待测(同时取部分上清测定蛋白浓度,蛋白定量试剂盒本所有售)。

血清(浆):取不抗凝或抗凝全血 1000~1500转/分,离心8分钟,取上层血清(浆)。一般测定时将血清或血浆用生理盐水1︰ 9稀释(具体稀释浓度以预实验结果为准)。

全血样本:取0.1ml抗凝全血加双蒸水至10ml,即按1︰ 99  稀释,充分混匀。如果您的样本量很少,可以减少取样量。例如取0.01ml或 0.02ml抗凝全血加双蒸水至1ml或2ml。取a ml(一般为0.1ml)进行检测,每个样本取样前必须充分混匀。

操作过程:

测定管

对照管

标准管

空白管

样本(ml)

a *

 

 

 

1mol/ml标准品应用液(ml)

 

a *

 

 

双蒸水(ml)

 

 

 

a *

底物缓冲液(ml)

0.5

0.5

0.5

0.5

显色应用液(ml)

0.5

0.5

0.5

0.5

混匀,37ºC  准确反应 6  分钟

抑制剂(ml)

0.03

0.03

0.03

0.03

透明剂(ml)

0.1

0.1

0.1

0.1

样本(ml)

 

a *

 

 

混匀,静置15分钟,波长412nm,0.5cm光径,双蒸水调零,测各管吸光度OD值。

注:a*所表示所取的样品量、标准品量、双蒸水的量,三者均相等:
①、血清(浆)测试前用生理盐水10倍稀释,参考取样量为 30~50l。
②、10%脑组织匀浆的参考取样量为30~50l。
③、1:99稀释后的全血稀释液取0.1ml,取样前每只要摇匀。
公式及举例:
(一)、组织匀浆中乙酰胆碱酯酶的计算:
1、单位定义:
每毫克组织蛋白在37ºC保温6分钟,水解反应体系中1mol基质为1个活力单位。
2、计算公式

image.png

(二)、血清中乙酰胆碱酯酶的计算:
1、单位定义:
每毫升血清样本在37ºC保温6分钟,水解反应体系中1mol基质为1个活力单位。
2、计算公式:

image.png

(三)、全血中乙酰胆碱酯酶的计算:
1、单位定义:
每毫升全血在 37℃保温6分钟,水解反应体系中1μmol基质为1个活力单位。
2、计算公式:

image.png