蔗糖磷酸合成酶(SPS)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
测定原理：
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：1000μg/mL 蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存;
试剂三：液体2mL×1瓶，4℃保存;
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：液体6mL×1瓶，4℃避光保存；
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，(在EP管中依次加入下列试剂)：
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 10 | 10 | | |
蒸馏水 | | 45 | 45 | 55 |
试剂一 | | | 10 | |
试剂二 | 45 | | | |
混匀，25℃准确水浴 10min |
试剂三 | 15 | 15 | 15 | 15 |
沸水浴中煮沸 10min 左右（盖紧，以防止水分散失），冷却 |
试剂四 | 210 | 210 | 210 | 210 |
试剂五 | 60 | 60 | 60 | 60 |
混匀，沸水浴 30min，冷却后，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，480nm 下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。 |
SPS 活力单位的计算：
1、按照蛋白浓度计算：
单位的定义：
每 mg 组织蛋白每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×(A测定管-A对照
管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算：
单位的定义：
每g组织每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(μg /min /g鲜重) =C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A测定管-A对照
管)÷(A标准管-A空白管)÷WC 标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL； V2：加入提取液体
积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。
