白蛋白含量检测试剂盒 ; 50T/48S

白蛋白含量检测试剂盒 ; 50T/48S

试剂盒组成和配制：

溶液的配制：

1、显色液：临用前根据样本数量按照试剂一：试剂二：试剂三 =10μL: 990μL:10μL（1010 μL，5T）的比例配 制显色液，充分混匀，现配现用；

2、标准品：10mg/mL 白蛋白标准液。临用前取 200μL10mg/mL 白蛋白标准液，加入200 μL 提取液 ，配制成 5mg/mL 白蛋白标准液 ，现配现用。

产品简介：

白蛋白是人体血浆中最主要的蛋白质，由肝脏合成，是人体内一种重要的营养物质，可以维持血浆渗透压，并可与多种营养物质、激素和药物相结合。白蛋白含量可以反映机体营养状态，也可排查影响肝脏代谢功能的疾病，如肝硬化、肝损伤、营养不良、恶性肿瘤等。血清白蛋白在 pH4.2 的缓冲液中带正电荷 ，在有非离子型表面活性剂存在时 ，可与带负电荷的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物，在波长 630nm 处有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比例。

注意 ：实验之前建议选择  2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、分析天平、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细 胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量)

1、组织样本 ：按质量（g): 提取液体积（ mL）为 1 : 5~10  的比例加入提取液（建议称取 0.1g 样本，加入1.0mL 提取液），冰浴匀浆后 ，于 4 , 8000g ，离心 10min ，弃沉淀 ，取上清液置于冰上待测。

2、细菌/细胞样本：按细菌/细胞数量（10⁶) ： 提取液体积（mL）为  5~10 : 1  的比例加入提取液（建议5百万细 菌/细胞加入1.0mL 提取液），冰浴超声破碎细菌/细胞（功率200W ，超声3s，间隔7s ，总时间5min），然后于 4℃ , 8000g，离心10min，弃沉淀 ， 取上清液置于冰上待测。

3、液体样本：直接测定。若液体有浑浊则离心取上清测定。

二、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至 630nm,可见分光光度计蒸馏水调零。

2、操作表：(微量玻璃比色皿/96 孔板中加入下列试剂）

三、白蛋白含量计算

1、按样本蛋白浓度计算

      白蛋白含量(mg/mg prot)= ΔA 测定 ×(C 标÷ΔA 标准) ×V 样÷(V 样 ×Cpr)=5×ΔA测定÷ΔA 标准÷Cpr

2、按样本质量计算

      白蛋白含量(mg/g 质量)= ΔA 测定 ×(C 标÷ΔA 标准)×V 样÷（W ×V 样÷V 样总)=5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

3、按细菌/细胞数量计算

      白蛋白含量（ mg/10⁶cell)=ΔA 测定×（ C 标÷ΔA 标准） ×V 样÷（V 样× N÷V 样总)=5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷N

4、按液体体积计算

      白蛋白含量(mg/mL)= ΔA 测定 × (C 标÷ΔA 标准)×V 样÷V 样 = 5 ×ΔA 测定÷ΔA 标准C 标：标准管浓度,5 mg/mL；V 样：加入样本体积，            0.02mL；V 样总： 加入提取液体积,1mL；Cpr：样本蛋  白质浓度,mg/mL；W：样本质量,g；N：细菌/细胞总数 ，以 10⁶计。

注意事项：

1、如果ΔA 测定小于 0.010 或测定管吸光值接近空白管 ，可以增加样本量后再进行测定；如果ΔA 测定大于 0.5,建议将样本上清用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2、如果样本加入显色剂后出现浑浊 ，建议将样本上清用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

取20μL人血清样本，用提取液稀释10倍，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算 ： ΔA测定=A测定-空白=0.426-0.124 =0.302,ΔA标准=A标准-A空白=0.406-0.124 =0.282，按液体体积计算得：白蛋白含量(mg/mL) =5 ×ΔA 测定÷ΔA 标准 ×10(稀释倍数)=53.546 mg/mL。