白蛋白含量检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
白蛋白是人体血浆中最主要的蛋白质 ， 由肝脏合成 ，是人体内一种重要的营养物质，可以维持血浆渗透压，并可与多种营养物质、激素和药物相结合。白蛋白含量可以反映机体营养状态，也可排查影响肝脏代谢功能的疾病，如肝硬化、肝损伤、营养不良、恶性肿瘤等。在酸性环境下，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚紫（Bromocresol Purple， BCP）结合生成绿色复合物 ，在 603nm 处有特定吸收峰 ，该复合物吸光值与白蛋白浓度成正比。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体110mL ×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体0.12mL×1支 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体25mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体0.3mL×1支 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、显色液：临用前根据样本数量按照试剂一：试剂二：试剂三 =10μL: 3990μL :40μL（4040 μL，20T）的比例 配制显色液，充分混匀，现配现用；
2、标准品：10mg/mL白蛋白标准液。 临用前取50μL10mg/mL白蛋白标准液 ， 加入150μL 提取液 ， 配制成2.5mg/mL白蛋白标准液 ，现配现用。
产品说明：
白蛋白是人体血浆中最主要的蛋白质,由肝脏合成 ，是人体内一种重要的营养物质 ，可以维持血浆渗透压 ， 并可与多种营养物质、 激素和药物相结合。白蛋白含量可以反映机体营养状态，也可排查影响肝脏代谢功能的疾 病 ， 如肝硬化、 肝损伤、营养不良、恶性肿瘤等。在酸性环境下，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚紫（Bromocresol Purple ，BCP）结合生成绿色复 合物 ， 在 603nm 处有特定吸收峰，该复合物吸光值与白蛋白浓度成正比。
Album ina+rpg xe so!,purple ——Green complex(603m)
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品 ：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、分析天平、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪,研钵/匀浆器/细 胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1、组织样本：按质量（g）:提取液体积（mL）1 : 5~10比例加入提取液（建议称取 0.1g样本,加入1.0mL提取 液) ，冰浴匀浆后, 于4℃, 8000g，离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
2、细菌/细胞样本：按细菌/细胞数量（10⁶) ：提取液体积(mL)5~10: 1的比例加入提取液(建议5百万细菌/细胞加入1.0mL提取液)冰浴超声破碎细菌/细胞(功率 200W，超声 3s ，间隔7s ,总时间 5min)然后于4℃ , 8000g ，离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
3、液体样本：直接测定。若液体有浑浊则离心取上清测定。
二、测定步骤
1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至 603nm,可见分光光度计蒸馏水调零。
2、操作表：(微量玻璃比色皿/96 孔板中加入下列试剂）
试剂名称(μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 20 | - | - |
标准品 | - | 20 | - |
提取液 | - | - | 20 |
显色液 | 200 | 200 | 200 |
混匀,常温静置20s,于 630nm 处测定各管吸光值，分别记为A测定、A标准和A空白，计算ΔA测定 =A测定-A空白ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准管只需测1-2次。注意：静置时间长短会影响检测结果，建议直接在微量玻璃比色皿/96 孔板中直接反应20s，测定吸光值 |
三、白蛋白含量计算
1、按样本蛋白浓度计算
白蛋白含量(mg/mg prot) =ΔA 测定 × (C 标÷ΔA 标准）×V 样÷（V 样 ×Cpr) =2.5 ×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr
2、按样本质量计算
白蛋白含量（mg/g 质量）= ΔA 测定 ×（C 标÷ΔA 标准）×V 样÷（W ×V 样÷V 样总）=2.5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W
3、按细菌/细胞数量计算
白蛋白含量（mg/10⁴cell）=ΔA 测定 ×（C 标÷ΔA 标准）×V 样÷（V 样× N÷V 样总）=2.5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷N
4、按液体体积计算
白蛋白含量(mg/mL) = ΔA 测定 × (C 标÷ΔA 标准)×V 样÷V 样 = 2.5 ×ΔA 测定÷ΔA 标准C 标 ：标准管度,2.5mg/mL；V样：加入样本体积, 0.02mL；V 样总：加入提取液体积, 1mL；Cpr：样本 蛋白质浓度,mg/mL；W：样本质量 ，g；N：细菌/细胞总数, 以 10⁶计。
注意事项：
1、如果ΔA 测定小于 0.005 或测定管吸光值接近空白管 ，可以增加样本量后再进行测定；如果ΔA 测定大于 0.4 ， 建议将样本上清用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。
2、如果样本加入显色剂后出现浑浊建议将样本上清用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例：
取20μL人血清样本，用提取液稀释10倍,按照测定步骤操作,用96孔板测得计算：ΔA测定=A测定-空白=0.371-0.117 =0.254,ΔA 标准 =A 标准-A 空白 =0.28-0.117 =0.163，按液体体积计算得：白蛋白含量(mg/mL)=2.5×ΔA测定÷ΔA标准 × 10 =38.957 mg/mL。
