支链淀粉检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理:
利用 80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,利用双波长比色法测定支链淀粉含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体50ml×1瓶;4℃保存
试剂二:乙醚50ml×1瓶;(自备)
试剂三:液体50ml×1瓶;4℃保存
试剂四:液体4ml×1瓶; 4℃保存
试剂五:液体1ml×1瓶;4℃保存
淀粉提取:
称取 0.01~0.02g 烘干样本(建议称取约 0.01g)于研钵中研碎,加入1ml试剂一,充分匀浆后转移到 EP管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃离心 5min,弃上清,留沉淀,加入1ml试剂二(乙醚)振荡混匀5min,3000g,25℃离心 5min,弃上清,留沉淀,加入1ml试剂三充分溶解,90℃水浴10min,冷却后待测。
测定步骤:
测定管:在EP管中依次加入100μl样本,70μl试剂四,600μl蒸馏水,10μl试剂五,220μl蒸馏水,混匀,分别测定 550nm和743nm处吸光值,△A测定=A550-A743。
空白管:在EP管中依次加入100μl试剂三,70μl试剂四,600μl蒸馏水,10μl试剂五,220μl蒸馏水,混匀,分别测定550nm和743nm处吸光值,△A空白=A550-A743。
支链淀粉含量计算:
标准条件下测定的回归方程为 y=0.1214x+0.0076;x 为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
支链淀粉含量(mg/mgprot)=[( △A 测定-△A 空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(△A 测定-△A 空白-0.0076) ÷Cpr
2、按样本干重计算
支链淀粉含量(mg/g 干重)= [(△A 测定-△A 空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2)=8.24×(△A 测定-△A空白-0.0076)
÷WV1:加入反应体系中样本体积,0.1ml V2:加入提取液体积,1 mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g