果糖含量(FT)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义:
果糖是一种最为常见的己酮糖,是葡萄糖的同分异构体,以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖,广泛应用于食品、医药、保健品生产中。
测定原理:
果糖与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水
试剂组成和配制:
提取液:液体100ml×1瓶,4℃保存;
试剂一:1mg/mL标准液10mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体25ml×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体8ml×1瓶,4℃避光保存;
试剂四:粉剂0.5g×1瓶,常温保存。
果糖提取:
称取 0.1~0.2g 样本,常温研碎;加入 0.5mL 提取液,适当研磨后快速转移到有盖离心管中;置于 80℃水浴锅中 10min(盖紧,以防止水分散失),振荡 3~5 次,冷却后,4000g ,25℃离心 10min,取上清;加入少量(约 2mg)试剂四,80℃脱色 30min(盖紧,以防止水分散失);再加入 0.5mL 提取液,4000g ,25℃离心 10min,取上清液测定。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在 EP 管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 | | | 30 |
试剂一 | | 30 | |
蒸馏水 | 30 | | |
试剂二 | 210 | 210 | 210 |
试剂三 | 60 | 60 | 60 |
混匀,95℃水浴反应30min(盖紧,以防止水分散失),冷却后取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中测定 480nm 处光吸收值,空白管、标准管和测定管分别记为 A1 、A2 和 A3。空白管和标准管只要做一管。 |
果糖含量计算:
1、果糖含量(mg/mg prot)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr此法需要自行测定蛋白浓度。
2、果糖含量(mg/g鲜重)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1) ÷WC 标准管:标准管浓度,1mg/mL
;V1:加入样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g
注 意
最低检测限为100ng/g鲜重或 1ng/mg prot。