外切β1，4葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
C1(EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。
测定原理：
采用3,5－二硝基水杨酸法测定C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存;
样品测定的准备：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为 500~1000 ：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率 20％或 200W，超声3s，间隔 10s ，重复 30 次)；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清(浆)样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，(在 EP 管中依次加入下列试剂)：
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 10 | 10 |
试剂一 | 100 | |
蒸馏水 | | 100 |
混匀，37℃准确水浴2h |
试剂二 | 200 | 200 |
混匀， 90℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，测540nm 下吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
C1 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归方程为 y = 6.4078x - 0.0673 ；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、血清(浆)C1 活力的计算：
单位的定义：
每 mL血清(浆)每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷V样÷T=14.305×(ΔA+0.0673)
3、细胞、细菌和组织中 C1 活力的计算：
(1) 按照蛋白浓度计算
单位的定义：
每 mg组织蛋白每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=14.305×(ΔA+0.0673)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每 g 组织每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=14.305×(ΔA+0.0673)÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 活力(μg /min /10⁴cell)=[1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0286×(ΔA+0.0673)1000 ：
1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL；V样:加入样本体积，0.01 mL；V样总加入提取液体积，1mL；T：反
应时间，120 min；Cpr:样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归方程为 y = 3.2039x - 0.0673；x 为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、血清(浆)C1 活力的计算：
单位的定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673)÷3.2039×V反总]÷V样÷T=28.61×(ΔA+0.0673)
3、细胞、细菌和组织中C1活力的计算：
(1) 按照蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673)÷3.2039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=28.61×(ΔA+0.0673)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每 g组织每分钟催化产生1 μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673)÷3.2039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
C1 活力(μg /min /10⁴cell)=[1000×(ΔA+0.0673)÷3.2039×V反总]÷(500×V样÷V 样总)÷T=0.057×(ΔA+0.0673)1000 ：
1mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.11mL； V样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1
mL；T：反应时间，120min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
