总氨基酸(T-AA)检测试剂盒 ; 80管/78样
测定原理:
铜离子(Cu2+)能与各种氨基酸络合产生蓝绿色络合物,在一定波长下颜色的深浅与总氨基酸的含量成正比,故可以用可见光分光光度计测其吸光度,通过换算得到总氨基酸含量。
试剂的组成与配制:
试剂一:粉剂×1支,4℃保存6个月。
试剂二:液体5ml×1瓶,4℃保存6个月。氨基酸反应液的配制:将试剂一加双蒸水至 160ml,充分混匀成蓝色混悬液,再缓慢滴加试剂二,边滴边搅至混悬液全部转换成淡蓝色透明溶液为止,4℃保存(粉剂较难溶解,试剂二滴加完后还需室温搅拌混匀半小时以上才能溶解完全)。
试剂三:粉剂×1支,4℃保存6个月。氨基酸显色剂配制:将试剂三加水至80ml充分混匀。(注意:有腐蚀性,配制时勿碰皮肤。)
试剂四:甘氨酸标准品 75.07mg/支×6支,4℃保存6个月。50mmol/L甘氨酸标准溶液的配制:将 75.07mg的甘氨酸标准品溶于20ml双蒸水中,充分混匀,现用现配。
试剂五:液体100ml×1瓶,4℃保存6个月。
操作步骤:
(一)、尿液的测定:
1、操作表:
空白管
标准管
测定管
双蒸水(ml)
1
50μmol/ml氨基酸标准液(ml)
尿液(ml)
氨基酸反应液(ml)
2
混匀,3500转/分离心10分钟,取上清液于650nm处,1㎝光径,双蒸水调零比色
2、计算工式:
(二)、血清(浆)的测定:
0.3
血清(浆)(ml)
试剂五(ml)
1.2
充分混匀,3500转/分离心10分钟取1ml上清待测。
上清(ml)
旋涡混匀
氨基酸显色剂(ml)
混匀,3500转/分离心10分钟,取上清液于650nm处,1㎝光径,双蒸水调零比色。
(三)、组织的测定:
1、样本前处理:
准确称取组织重量,按重量体积比加入 9 倍生理盐水,制成 10%匀浆,3500 转/分离心 10 分钟,取上清待测。同时取 10%匀浆上清进行蛋白测定。
2、操作表:
匀浆(ml)
充分混匀,3500转/分离心10分钟取1ml 上清待测
混匀,3500 转/分离心10分钟,取上清液于650nm处,1㎝光径,双蒸水调零比色。
3、计算公式: