N-乙酰-β-D葡萄糖苷酶(NAG)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
NAG 是溶酶体中的一种酸性水解酶，广泛存在于各种组织、体液和细胞中，以前列腺和肾近曲小管细胞内含量最高。NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理：
NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算 NAG 活性。
自备用品：
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入2.5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体13mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为 500~1000 ：1 的比例(建议 500万细菌或细胞加入 1mL 提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率 20％或 200W ，超声3s ，间隔 10s ，重复30次)；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清(浆)样品：直接检测。
测定步骤：
1、 酶标仪或分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、样本测定(在EP管或96孔板中依次加入下列试剂)：
试剂名称(µL） | 测定管 | 对照管 |
试剂一 | 25 | |
蒸馏水 | | 25 |
试剂二 | 35 | 35 |
样本 | 10 | 10 |
迅速混匀，放入 37℃准确水浴30min |
试剂三 | 130 | 130 |
充分混匀，400nm 处测定吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。 |
NAG活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定的回归方程为y=0.00585x+0.0083 ；x为标准品浓度(nmol/mL)，y为吸光值。
2、血清(浆)NAG 活力的计算：
单位的定义：
每mL血清(浆)每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083)÷0.00543×V反总]÷V样÷T=39.89×(ΔA-0.0083)
3、细胞、细菌和组织中NAG活力的计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083)÷0.00585×V 反总]÷(V样×Cpr)÷T=38.89×(ΔA-0.0083)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG 活性(nmol/min/g鲜重)= [(ΔA-0.0083)÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=39.89×(ΔA-0.0083)÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083)÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V 样总)÷T=0.8×(ΔA-0.0083)V反总：反应体系总
体积，0.07mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g； 500 ：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，30min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定的回归方程为y= 0.0039x +0.0083 ；x 为标准品浓度（nmol/mL），y为吸光值。
2、血清(浆)NAG 活力的计算：
单位的定义：
每mL血清(浆)每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083)÷0.0039×V反总]÷V样÷T=59.83×(ΔA-0.0083)
3、细胞、细菌和组织中 NAG 活力的计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083)÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=59.83×(ΔA-0.0083)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG 活性(nmol/min/g鲜重)= [(ΔA-0.0083)÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=59.83×(ΔA-0.0083)÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083)÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.12×(ΔA-0.0083)V 反总：反应体系总
体积，0.07mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g； 500 ：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，30min。
