总多糖含量检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义:
多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。
测定原理:
利用水提醇沉法提取总多糖,苯酚-硫酸法测定总多糖含量。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、无水乙醇、浓硫酸、蒸馏水、水浴锅。
试剂组成和配制:
试剂一:12mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:无水乙醇,自备。
试剂三:浓硫酸,自备。
总多糖提取:
样本烘干粉碎,称取约 0.05g 样本,加入1mL水,充分匀浆。100℃水浴提取2h(必须盖紧盖子防止水分流失),冷却后 10000g 离心10min,取上清。吸取 0.2mL上清,慢慢加入0.8mL无水乙醇,混匀后 4℃静置过夜,10000g 离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL水,充分混匀溶解沉淀。
测定步骤:
1、酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 490nm。
2、吸取200µL上清,加入100µL试剂一和 0.5mL浓硫酸,混匀后90℃水浴20min,流水冷却。取 200µL加入酶标板,于 490nm 下测定吸光值 A。
总多糖含量计算:
以葡萄糖作为对照品 ,标准条件下测定回归方程为y= 7.981x - 0.0037 ,R²= 0.9973 ,x 为葡萄糖含量(mg/mL),y为吸光值。
总多糖含量(μg/g干重)= (A+0.0037)÷7.981×V1÷V2×V3÷W×1000=626.49×(A+0.0037)÷WV1:醇沉后重新溶解后的体积,1mL
;V2:进行醇沉的体积,0.2mL;V3,提取时加入水的体积,1mL;W:样本质量,g;1000 ,mg 到 μg 的换算系数。