总巯基(-SH)检测试剂盒 ; 48T
测定原理:
5,5’-二硫代双,2-硝基苯甲酸(DTNB)与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物,可进行比色定量测定。
试剂的组成与配制:
试剂一:标准品粉剂,3支,4℃密封保存 6个月。10mmol/L 标准品贮备液的配制:每次测定前将 1支标准品粉剂加1ml试剂三缓冲液溶解,即为10mmol/L 标准品贮备液,4℃密封保存。500μmol/L的标准应用液的配制:10mmol/L 标准品∶试剂三缓冲液=1∶19 即 20 倍稀释配成应用液,按所需量现用现配。试剂二:透明剂,2ml×1 瓶,4℃密封保存 12 个月(天冷时会凝固,每次测试前适当水浴加温以加速溶解,直至透明方可应用)。试剂三:缓冲液,20ml×1 瓶,4℃密封保存 6 个月。试剂四:显色剂,3ml×1 瓶,4℃避光保存 6 个月。工作液一的配制:按透明剂∶缓冲液∶显色剂=1∶50∶25 的比例混合,用多少配多少。工作液二的配制:按透明剂∶缓冲液=1∶75 的比例混合,用多少配多少。
操作步骤:
1、样本前处理:组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰浴条件下机械匀浆,制成 10%的组织匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测。血清(浆)样本: 直接取样10μl本试剂盒仅用于科研实验
2、操作表:
标准孔
空白孔
测定孔
对照孔
500μmol/L 标准
10μl
试剂三
待测样本
工作液一
150μl
工作液二
混匀,静置10分钟,于595nm处,1cm光径,双蒸水调零,测各管OD值。
计算公式:
1、组织中巯基计算公式:
2、血清中巯基计算公式: