总多糖含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义:
多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。
测定原理:
利用水提醇沉法提取总多糖,苯酚-硫酸法测定总多糖含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、无水乙醇、浓硫酸、蒸馏水、水浴锅。
试剂组成和配制:
试剂一:12mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:无水乙醇,自备。
试剂三:浓硫酸,自备。
总多糖提取:
样本烘干粉碎,称取约 0.05g 样本,加入1mL水,充分匀浆。100℃水浴提取2h(必须盖紧盖子防止水分流失),冷却后 10000g离心10min,取上清。吸取 0.2mL 上清,慢慢加入0.8mL无水乙醇,混匀后 4℃静置过夜,10000g 离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL水,充分混匀溶解沉淀。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至 490nm,蒸馏水调零。
2、吸取 400µL上清,加入200µL试剂一和 1mL 浓硫酸,混匀后90℃水浴20min ,流水冷却。取1mL加入比色皿,于490nm下测定吸光值 A。
总多糖含量计算:
以葡萄糖作为对照品 ,标准条件下测定回归方程为y=15.962x - 0.0037 ,R2= 0.9973 ,x为葡萄糖含量(mg/mL),y为吸光值。
总多糖含量(μg/g干重)=(A+0.0037)÷15.962×V1÷V2×V3÷W×1000=313.24×(A+0.0037) ÷WV1 :醇沉后重新溶解后的体积,1m
L;V2 :进行醇沉的体积,0.2mL;V3,提取加入水的体积,1mL;W:样本质量,g;1000 ,mg 到 μg 的换算系数。