纤维素含量(CLL)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维，是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。
测定原理：
纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下，可脱水生成β-糠醛类化合物。 β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、80％乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体10mL× 1支，4℃保存。
总多糖提取：
1、细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，90℃水浴20min（加热过程中 EP管可能爆开，建议用胶带封口或使用防爆 EP管），冷却至室温，6000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，6000g 25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡15小时，6000g 25℃离心10min ，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。
2、纤维素的提取：称取烘干的CWM约5mg ，加入0.5mL蒸馏水充分匀浆(若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入 0.5mL 蒸馏水匀浆，或者用匀浆器匀浆) ，匀浆液转移至 EP 管中，用蒸馏水定容至0.5mL，置于冰水浴中，缓慢加入0.75mL浓硫酸，混匀，冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心10min，取上清液，用蒸馏水稀释20倍后待测
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制：在试剂二中加入4mL试剂三，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用不完的试剂 4℃保存一周；
4、加样表（在 EP 管中反应）：
试剂(μL） | 空白管 | 测定管 |
样本 | | 150 |
蒸馏水 | 150 | |
工作液 | 35 | 35 |
浓硫酸 | 315 | 315 |
混匀，置 95 度水浴中 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，取 200μL 至微量石英比色皿或 96孔板中，于 620nm 处，分别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A 测定管-A 空白管。 |
注 意：
1、空白管只要做一管。
2、由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
纤维素含量计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定的回归方程为y= 7.875x - 0.0043 ；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值 。
2、按样本质量计算：
纤维素(mg /g干重)= [(ΔA＋0.0043)÷7.875×V1]÷(W×V1÷V2)×20=3.17×(ΔA＋0.0043)÷W。V1 ：加入样本体积，0.15mL；
V2 ：加入提取液体积，1.25mL；W：样本干重，约 5 × 10-³g；20：样本稀释倍数。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定的回归方程为 y = 5.25x - 0.0043 ；x为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值。
2、按样本质量计算：
纤维素（mg /g干重)= [(ΔA＋0.0043)÷5.25×V1]÷(W×V1÷V2)×20=4.76×(ΔA＋0.0043)÷WV1：加入样本体积，0.15mL；V2
：加入提取液体积，1.25mL；W：样本干重,约5× 10-³g；20 ：样本稀释倍数。
注 意：
最低检测限为 1mg/g 干重或 10ng/ mg prot。
