总糖含量检测试剂盒 ; 100管/96样

总糖含量检测试剂盒 ; 100管/96样

测定意义： 

糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖也可称为碳水化合物，包括可溶性的单糖，二糖以及不溶性的淀粉，纤维素，几丁质等。

测定原理： 

总糖酸水解为还原糖，在 NaOH 和丙三醇存在下，DNS 试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物，在过量的 NaOH 碱性溶液中呈桔红色，在 540nm 处有最大吸收峰，以此测定样品中的总糖含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

总多糖提取：

组织：称取约0.1g样品，加入1mL试剂一，1.5mL蒸馏水，匀浆，95℃水浴中加热 30min ，加入1mL 试剂二，混匀，用蒸馏水定容至10mL ，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测 。（注意稀释，见注意事项）液体样本：取0.1mL样本，加入1mL 试剂一，1.5mL 蒸馏水，匀浆，95℃水浴中加热 30min ，加入1mL试剂二，8000g 25℃离心10min，取上清液待测 。（注意稀释，见注意事项）

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至 95 度。

3、加样表：

注 意：

1、空白管只要做一管。

2、如果 ΔA大于2，需要将上清液用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。

总糖含量计算：

1、标准条件下：

      测定的回归方程为y=0.3002x - 0.0507；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

2、按样本质量计算：

      总糖(mg /g鲜重)= [(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷(W×V1÷V2)×稀释倍数=33.311×(ΔA＋0.0507)÷W×稀释倍数。

3、按样本蛋白浓度计算：

      总糖(mg/mg prot)=[(ΔA＋0.0507)÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr)×稀释倍数=3.3311×(ΔA＋0.0507)÷Cpr×稀释倍数V1：加入样本体

      积，0.008mL；V2：加入提取液体积，10mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

4、按照液体体积计算：

      总糖(mg /mL)=[(ΔA＋0.0507)÷0.3002×V1]÷(V3×V1÷V2)×稀释倍数=116.59×(ΔA＋0.0507)×稀释倍数V1：加入样本体积，

      0.008mL；V2：加入提取液体积，10mL/3.5mL； V3:液体样本，0.1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

注 意：

最低检测限为 1mg/g 鲜重或 10ng/mg prot。