酸性木聚糖酶(ACX)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，ACX 一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。
测定原理：
ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 ACX 活力。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
缓冲液：液体 90mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1瓶，4℃避光保存。（若出现白色絮状或颗粒状沉淀，可60℃加热溶解后使用）。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶提取：
1、发酵液：发酵液于 8000g ，4℃ , 离心15min，取上清，作为待测样品。
2、酶干粉：称约 0.1mg，加1mL缓冲液溶解待测。
3、组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL缓冲液）进行冰浴匀浆，然后8000g ，4℃, 离心10min，取上清待测。
测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至540nm。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
样本(μL） | | 60 |
灭活的样本(μL）(95℃水浴 15min） | 60 | |
缓冲液(μL） | 90 | 90 |
试剂一(μL） | 60 | 60 |
混匀，盖紧瓶盖，50℃水浴，反应 30min ，立即沸水浴 10min 灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系) |
试剂二(μL） | 90 | 90 |
混匀，沸水浴显色 5min ，取 200µL于微量石英比色皿/96 孔板中540nm处测定吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。 |
ACX 计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 2.5554x - 0.002，R²= 0.9983
1、按液体体积活力计算：
酶活定义：
50℃ , pH9.0条件下，每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×10⁶= 435×(ΔA+0.002)
2、按蛋白浓度计算：
酶活定义：
50℃ , pH4.8 条件下，每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol还原
糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA +0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×10⁶÷Cpr= 435×(ΔA+0.002 )÷Cpr
3、按鲜重计算：
酶活定义：
50℃ , pH4.8 条件下，每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA +0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×10⁶÷W= 435×(ΔA +0.002)÷W150：木糖的分子量；
T：反应时间，30min；稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5；10⁶：转化因子，即 1mg/mL=10⁶ng/mL；Cpr：样本蛋白浓
度，mg/mL；W：样本质量，g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 1.2777x - 0.002 ，R²= 0.9983
1、按液体体积活力计算：
酶活定义：
50℃ , pH4.8条件下，每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.002)÷1.2777÷150÷T×稀释倍数×10⁶=869.6×(ΔA+0.002)
2、按蛋白浓度计算：
酶活定义：
50℃ , pH4.8条件下，每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA +0.002)÷1.2777÷150÷T×稀释倍数×10⁶÷Cpr= 869.6×(ΔA +0.002 )÷Cpr
3、按鲜重计算：
酶活定义：
50℃ , pH4.8条件下，每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA +0.002)÷1.2777÷150÷T×稀释倍数×10⁶÷W= 869.6×(ΔA+0.002)÷W150：木糖的分子量；
T：反应时间，30min；稀释倍数=V反总÷V 样=300µL÷60µL=5；10⁶：转化因子，即1mg/mL=10⁶ng/mL；Cpr：样本蛋白浓
度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项：
1、 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2、试剂盒2-8℃保存，保质期3个月，建议尽快使用。
