几丁质酶检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨) ，以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿，蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体 10mL×1瓶，4℃保存。（若出现结晶，可 80℃左右加热溶解后使用）。
试剂三：液体 10mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体 20mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后10000g ，4 ℃, 离心 20min，取上清置于冰上待测。
3、培养液：直接测定。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
粗酶液(µL） | 400 | 400 |
提取液(µL） | 600 | 200 |
试剂一 (µL） | | 400 |
混匀，37℃水浴 1h |
试剂二(µL） | 200 | 200 |
混匀，沸水浴 7min ，5000rpm ，4℃, 离心 10min ，取上清 1000µL。 |
试剂三(µL） | 200 | 200 |
试剂四(µL） | 400 | 400 |
混匀，37℃, 15min，蒸馏水调零，1mL 玻璃比色皿，测定 A585，ΔA=A 测定-A 对照。 |
计算公式：
标准曲线：y = 0.3088-0.003，R²= 0.9995
1、按照样本重量计算：
酶活定义：
37℃条件下，每克组织每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(mg/h/g鲜重)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=8.096×(ΔA +0.003)÷W
2、按照蛋白浓度计算：
酶活定义：
37℃条件下，每毫克蛋白每小时分解几丁质产生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷(V样×Cpr)÷T=8.096×(ΔA +0.003)÷Cpr
3、按细胞数量计算：
酶活定义：
37℃条件下，每 10⁴个细胞每小时分解几丁质产生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /10⁴cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)=8.096×(ΔA +0.003)÷细胞数量
4、按液体体积计算:
酶活定义：
37℃条件下，每毫升培养液每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷V样=8.096×(ΔA+ 0.003）V 反总：反应体系总体积，1mL；V样：反应
体系中样本体积，0.4mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、反应结束后立即进行比色。
2、试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
