几丁质酶检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨) ，以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在 585nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（土壤样品专用）和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 105mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1瓶，4℃保存。（若出现结晶，可 80℃左右加热溶解后使用）。
试剂三：液体 5mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体 10mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声3秒，间隔7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4 ℃, 离心20min，取上清置于冰上待测。
3、培养液：直接测定。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
粗酶液(µL） | 80 | 80 |
提取液(µL） | 120 | 40 |
试剂一 (µL） | | 80 |
混匀，37℃水浴 1h |
试剂二(µL） | 40 | 40 |
混匀，沸水浴 7min ，5000rpm ，4℃ , 离心 10min ，取上清 200µL。 |
试剂三(µL） | 40 | 40 |
试剂四(µL） | 80 | 80 |
混匀，37℃ , 15min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 A585，ΔA=A 测定-A 对照。 |
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.3088 - 0.003，R²= 0.9995
1、按照样本重量计算：
酶活性定义：
37℃条件下，每克组织每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(mg/h/g鲜重)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=8.096×(ΔA +0.003)÷W
2、按照蛋白浓度计算：
酶活定义：
37℃条件下，每毫克蛋白每小时分解几丁质产生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 8.096×(ΔA +0.003)÷Cpr
3、按细胞数量计算：
酶活定义：
37℃条件下，每 10⁴个细胞每小时分解几丁质产生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /10⁴cell)=(ΔA+0.003）÷0.3088×V 反总÷(V样÷V样总×细胞数量)=8.096×(ΔA +0.003)÷细胞数量
4、按液体体积计算:
酶活定义：
37℃条件下，每毫升培养液每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷V样=8.096×(ΔA +0.003）V 反总：反应体系总体积，1mL；V 样：反
应体系中样本体积，0.4mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.1544x - 0.003 ，R²= 0.9995
1、按照样本重量计算：
酶活性定义：
37℃条件下，每克组织每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(mg/h/g鲜重)=(ΔA+0.003)÷0.1544×V反总÷(V样÷V样总×W) ÷T=16.192×(ΔA +0.003)÷W
2、按照蛋白浓度计算：
酶活定义：
37℃条件下，每毫克蛋白每小时分解几丁质产生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 16.192×(ΔA +0.003)÷Cpr
3、按细胞数量计算：
酶活定义：
37℃条件下，每 10⁴个细胞每小时分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /10⁴cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)=16.192×(ΔA +0.003)÷细胞数量
4、按液体体积计算:
酶活定义：
37℃条件下，每毫升培养液每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反总÷V样=16.192×(ΔA +0.003)V 反总：反应体系总体积，1mL；V 样：反
应体系中样本体积，0.4mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、反应结束后立即进行比色。
2、试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
