β葡萄糖苷酶(β-GC)-纤维二糖酶检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
β-GC（EC 3.2.1.21 ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化 β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC 负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC 水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味； β-GC 能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。
测定原理：
β-GC 分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入10mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体 25mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体 50mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为500~1000 ：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、培养液、血清（浆）等液体样本：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
试剂一 | 400 | |
蒸馏水 | | 400 |
试剂二 | 500 | 500 |
样本 | 100 | 100 |
迅速混匀，放入37℃准确水浴 30min 后，立即放入 95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），8000g ，4℃, 离心 5min，取上清液 |
上清液 | 500 | 500 |
试剂三 | 1000 | 1000 |
充分混匀，室温静置 2min 后， 400nm 处测定吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
Β-GC活力计算：
标准条件下测定的回归方程为y=0.00543x -0.0027；x为标准品浓度(nmol/mL)，y为吸光值。
(1) 按液体体积计算
单位的定义:
每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷V样÷T=61.39×(ΔA+0.0027)含量测定试剂盒。
(2) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027)÷Cpr需要另外测定，建
议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(3) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(nmol/min /g鲜重) =[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=61.39×(ΔA +0.0027)÷W
(4) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GC活力(nmol/min /10⁴cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(500×V样÷V 样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)V 反总：反应体
系总体积，1mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积,1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W:
样本质量，g； 500 ：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间30min。
