α葡萄糖苷酶(α-GC)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖，不仅与细胞壁的松弛或加固有关，而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。
测定原理：
α-GC 分解对-硝基苯- α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入12mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体 15mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体 15mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)500~1000 ：1的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W ，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
试剂一 | 120 | |
蒸馏水 | | 120 |
试剂二 | 150 | 150 |
样本 | 30 | 30 |
充分混匀，放入 37℃准确水浴 30min 后，立即放入 95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），8000g ，4℃, 离心 5min，取上清液（在 EP 管或96孔板中加入下列试剂） |
上清液 | 70 | 70 |
试剂三 | 130 | 130 |
充分混匀，室温静置 2min 后， 400nm 处测定吸光值 A ，计算 ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
α-GC活力计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y =0.00585x -0.0027；x为标准品浓度(nmol/mL)，y 为吸光值。
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反总]÷(V 样×Cpr)÷T=56.98×(ΔA+0.0027)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T ==56.98×(ΔA+0.0027)÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V 样总)÷T=0.114×(ΔA +0.0027)V 反总：反应
体系总体积，0.3mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积,1mL；Cpr：样本蛋白质浓mg/mL；
W：样本质量，g； 500 ：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间30min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0039x -0.0027；x 为标准品浓度（nmol/mL），y 为吸光值。
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=85.47×(ΔA+0.0027)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=85.47×(ΔA+0.0027)÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-GC活性(nmol/min/10⁴cell) =[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V 样总)÷T=0.171×(ΔA +0.0027)V 反总：反应体系
总体积，0.3mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g； 500 ：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间30min。
