β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA ，因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
测定原理：
β-1,3-GA 水解昆布多糖，内切 β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存。
试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存液体30mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为500~1000 ：1的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W ，超声3s，间隔10s，
重复30次）；12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 35 | 35 |
蒸馏水 | | 35 |
试剂一 | 35 | |
充分混匀，放入 37℃水浴 60 min |
试剂二 | 230 | 230 |
充分混匀，95℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 550nm 处记录各管吸光值 A ，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。 |
β-1,3-GA活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下:
测定回归方程为 y = 0.0958x -0.0192；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、血清（浆）β-1,3-GA 活力的计算:
单位的定义：
每mL血清（浆）每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)
3、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算:
(1) 按蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[(ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/g 鲜重)=[(ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)= 10.438×(ΔA +0.0192)÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每小时产生 1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h /10⁴cell)= [(ΔA+0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)V1：加入反应体系中样本体积，
0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下:
测定回归方程为y = 0.0479x -0.0192；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、血清（浆）β-1,3-GA 活力的计算:
单位的定义：
每mL血清（浆）每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mL)=[(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷V1=20.876×(ΔA +0.0192)
3、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)=20.876×(ΔA +0.0192)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/g鲜重)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)= 20.876×(ΔA +0.0192)÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h /10⁴cell)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0416×(ΔA+0.0192)V1：加入反应体系中样本体积，
0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
