山梨醇脱氢酶(SH)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
SH（EC 1.1.1.14 ）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。
测定原理：
SH 催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原 NAD+生成 NADH，测定340nm吸光度增加速率可以计算 SH 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 20mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入15mL蒸馏水，用不完的试剂仍 4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入15mL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)500~1000 ：1的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔 10s ，重复 30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g
组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
试剂名称(μL) | 测定管 |
试剂一 | 400 |
试剂二 | 300 |
试剂三 | 300 |
混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确水浴5min |
样本 | 50 |
将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中，加样本的同时开始计时，记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2分 20 秒时的吸光度 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。 |
SH活性计算：
1、血清(浆)SH活力的计算:
单位的定义：
每毫升血清(浆)每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V 样÷T=1688×ΔA
2、组织、细菌或细胞中SH活力的计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=1688×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=1688×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH（nmol/min/10⁴cell）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.376×ΔAV反总：反应体系总体积，1.05×10-3
L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取
液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
