山梨醇脱氢酶(SH)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
SH（EC 1.1.1.14 ）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。
测定原理：
SH催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原NAD⁺生成NADH，测定340nm吸光度增加速率可以计算 SH 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
样品测定的准备：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为 500~1000 ：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或 200W ，超声3s ，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 在试剂二中加入 7.6mL 试剂一和 11.4mL 蒸馏水充分溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；用不完的试剂 4℃保存一周；
(2) 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和 190μL 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值A1和2min20s 后的吸光值A2 ，计算 ΔA=A2-A1。
SH活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)SH 活力的计算:
单位的定义：
每毫升血清(浆)每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V 样÷T=1608×ΔA
2、组织、细菌或细胞中SDH活力的计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min /g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=1608×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH（nmol/min /10⁴cell）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=3.216×ΔAV反总：反应体系总体积，2×10-⁴L；ε
：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体
积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)SH活力的计算:
单位的定义：
每毫升血清（浆）每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min /mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T=3216×ΔA
2、组织、细菌或细胞中SH活力的计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min /g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=3216×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
SH(nmol/min /10⁴cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=6.426×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10-⁴L；ε ：
NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体
积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
