山梨醇含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义:
山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是糖运输形式之一,而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此,在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。
测定原理:
山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物,在655nm波长有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 10mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体 10mL×1瓶,4℃保存。
山梨醇的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1 :5~10的比例(建议称取约0.2g组织,加入2mL蒸馏水),研磨成匀浆,95℃水浴 10分钟(盖紧,以防止水分散失),冷却后,8000g ,25℃离心 10min,取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至655nm,蒸馏水调零。
2、加样表(在 EP 管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) | 空白管 | 测定管 |
试剂一 | 150 | 150 |
试剂二 | 140 | 140 |
样本 | | 1000 |
蒸馏水 | 1000 | |
混匀后室温静置 15min ,8000g ,25℃离心 10min,取上清液测 655nm 下吸光值 A ,计算 ΔA=A 测定管-A空白管。空白管只要做一管。 |
山梨醇含量计算:
1、标准条件下:
测定回归方程为 y = 0.352x - 0.002;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值 。
2、按照样本质量计算:
山梨醇含量(mg /g鲜重)=[(ΔA+0.002)÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA+0.002)÷W
3、按照样本蛋白浓度计算:
山梨醇含量(mg /mg prot)=[(ΔA+0.002)÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA+0.002)÷Cpr。V1 :加入样本体积,1mL;V2 :
加入提取液体积,2 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注 意:最低检测限为 1μg/g 鲜重或 0.01μg /mg prot