半纤维素含量检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义:
半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物,是构成细胞初生壁的主要成分,广泛存在于植物中,是一种新型可利用能源。
测定原理:
半纤维素经酸处理后转化成还原糖,与DNS生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,吸光值大反映了半纤维素含量。
需自备的仪器和用品:
天平、40目筛,离心机,恒温水浴锅、烘箱、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 60mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体 12mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体 12mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体 10mL×1瓶,4℃避光保存。
样品处理:
样品 80℃烘干至恒重,粉碎,过40目筛。
测定操作表:
空白管
测定管
样本(g)
0.02
试剂一 (μL)
1000
90℃水浴 10min ,25℃, 8000g 离心 10min,弃上清
蒸馏水(μL)
充分混匀,25℃, 8000g 离心 10min ,此步骤重复 3 次,取沉淀 105℃,烘干至恒重
试剂二(μL)
200
90℃水浴 1h,自然冷却
试剂三(μL)
混匀,25℃, 8000g 离心 10min
上清(μL)
试剂四(μL)
150
650
充分混匀,90℃水浴 5min,自然冷却,25℃, 8000g 离心 10min于 1mL 玻璃比色皿中,测定 540nm 处吸光值 A 。分别记为 A 空白管和 A 测定管,ΔA=A 测定管-A空白管。空白管只要做一管。
计算公式:
1、标准条件下:
测定的回归方程为y= 0.3968x+0.0306 ,R²=0.9961;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
2、半纤维素含量:
(mg/g干重)=(△A-0.0306)÷0.3968÷(W÷V样总)=1.01×(△A-0.0306)÷WW:样品质量,g;V 样总:加入提取液体,0.4mL。检测
限为 1mg/g。