内切-β-1，4-葡聚糖酶(Cx)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
Cx（EC3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，Cx主要作用于非晶态纤维素和水溶性纤维素衍生物，随机水解糖苷键，将其分解成葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖和其他寡聚体。
测定原理：
采用3,5－二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体 60mL×1瓶，4℃保存。
样品测定的准备：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为500~1000 ：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、加样表（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 50 | 50 |
试剂一 | 500 | |
蒸馏水 | | 500 |
混匀，37℃准确水浴2h |
试剂二 | 1000 | 1000 |
混匀， 90℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，测 540nm 下吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
Cx活性计算：
1、标准条件下:
测定回归方程为y = 6.4078x - 0.0673 ；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、血清(浆)Cx 活力的计算:
单位的定义：
每mL血清（浆）每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V 反总]÷V样÷T=14.305×(ΔA+0.0673)
3、细胞、细菌和组织中Cx活力的计算:
(1) 按照蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx 活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟催化产生1 μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx 活力(μg /min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min /10⁴cell)=[1000×(ΔA+0.0673)÷6.4078×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0286×(ΔA+0.0673)1000 ：1mg/
mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.55mL； V样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：
反应时间，120min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
