β-木糖苷酶检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外， β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
测定原理：
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm 光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 2mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体 20mL×1瓶，4℃保存
粗酶液提取：
1、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃ , 离心20min，取上清待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声3秒， 间隔7秒，总时间 3min）； 然后10000g，4℃ , 离心10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
酶液(μL） | 200 | 200 |
试剂一 (μL） | | 50 |
试剂二(μL） | 400 | 350 |
混匀，45℃水浴 20min |
试剂三(μL） | 400 | 400 |
混匀，静置 5min，蒸馏水调零，405nm 处测定吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。 |
β-木糖苷酶活性计算公式：
标准曲线：y=13.226x+0.0011 ，R²=0.9998；x 为标准品浓度(μmol/mL），y为吸光值ΔA。
1、按蛋白浓度计算:
酶活定义：
45℃, pH7.4 时每毫克蛋白1min内催化产生1nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000
2、按样本质量计算:
酶活定义：
45℃, pH7.4时每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g鲜重)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3、按细胞数量计算:
酶活定义：
45℃, pH7.4 时每10⁴个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个 酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/10⁴cell)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷V样×V样总÷细胞数量(万个)÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)
÷细胞数量（万个）。
4、按液体体积计算:
酶活定义：
45℃, pH7.4时每毫升液体1min内催化产生1nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷V样÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)V 样总：加入提取液体积，
1mL； V反总：反应总体积，0.6mL；V 样：反应中样 品体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反
应时间，20min ；1000:1μmol/mL=1000nmol/mL；ΔA控制在 0.01-2 范围内,若ΔA大于2，可适当减小样本量。标准曲线线性范
围为：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
