β-木糖苷酶检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
测定原理：
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定405nm 光吸收增加速率，可计算 β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 1mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 10mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体 10mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃, 离心20min，取上清待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声3秒， 间隔7 秒，总时间3min）； 然后10000g ，4℃, 离心10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至405nm。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
酶液(μL） | 40 | 40 |
试剂一 (μL） | | 10 |
试剂二(μL） | 80 | 70 |
混匀，45℃水浴 20min |
试剂三(μL） | 80 | 80 |
混匀，静置 5min ，405nm 处测定吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。 |
β-木糖苷酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x为标准品浓度(μmol/mL)，y为吸光值ΔA
1、按蛋白浓度计算:
酶活定义：
45℃, pH7.4时每毫克蛋白1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷（V样×Cpr)÷T×1000
2、按样本质量计算：
酶活定义：
45℃, pH7.4 时每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
Β-木糖苷酶活性（nmol/min/g鲜重)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3、按细胞数量计算：
酶活定义：
45℃, pH7.4 时每10⁴个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
Β - 木糖苷酶活性(nmol/min/10⁴cell)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷V样×V样总÷细胞数量(万个)÷T×1000=11.34×(ΔA-
0.0011)÷细胞数量（万个）
4、按液体体积计算:
酶活定义：
45℃, pH7.4时每毫升液体1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0011)÷13.226×V反总÷V样÷T×1000=11.34×( ΔA-0.0011)V 样总：加入提取液体积，
1mL； V 反总：反应总体积，0.12mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：
反应时间，20min ；1000:1μmol/L=1000nmol/L。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=6.613x+0.0011，R²=0.9998；x为标准品浓度(μmol/mL)，y为吸光值ΔA
1、按蛋白浓度计算:
酶活定义：
45℃, pH7.4时每毫克蛋白1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶 活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0011)÷6.613×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000
2、按样本质量计算：
酶活定义：
45℃, pH7.4时每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g鲜重)=(ΔA-0.0011)÷6.613×V反总÷（V样÷V样总×W)÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W
3、按细胞数量计算：
酶活定义：
45℃, pH7.4时每 10⁴个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/10⁴cell)=(ΔA-0.0011)÷6.613×V反总÷V样×V样总÷ 细胞数量（万个）
4、按液体体积计算：
酶活定义：
45℃, pH7.4时每毫升液体1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0011)÷6.613×V反总÷V样÷T×1000=22.68×( ΔA-0.0011)V样总：加入提取液体积，1
mL； V 反总：反应总体积，0.12mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：
反应时间，20min ；1000:1μmol/mL=1000nmol/mLΔA 控制在 0.01-1 范围内，若ΔA 大于 1 ，可适当减小样本量。标准曲线线
性范围为：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
