麦芽糖含量检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义:
麦芽糖是由两个葡萄糖单位经由α-1 ,4 糖苷键连接而成的二糖,又称麦芽二糖。麦芽糖是淀粉、糖原、糊精等大分子多糖类物质在β-淀粉酶催化下的主要水解产物,再经麦芽糖酶催化,则被水解成两个葡萄糖分子。麦芽糖不仅参与了生物体内糖代谢,其在食品和医药工业等行业也着广泛应用,是产品质量控制的重要指标之一。
测定原理:
麦芽糖酶将样品中麦芽糖水解为葡萄糖; 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 70mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加6 mL试剂一溶解后待用,用不完的试剂分装后-20℃保存。
试剂三:液体 10ml×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体 10ml×1瓶,4℃保存。
麦芽糖提取:
按照样本质量(g):试剂一体积(mL)为1 :5~10的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL试剂一),研磨成匀浆,95℃水浴10分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g ,25℃离心10min ,取上清液备用。
测定步骤:
1、酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm。
2、混合试剂的配制:使用前将试剂三和试剂四1:1 等体积混合,用多少配多少。
3、测定管:取 200μL上清,加入100μL试剂二,混匀,55℃反应60 min,待测。对照管:200μL上清,加入100μL试剂一,混匀,55℃反应 60 min,待测。
4、加样表(在 96 孔板中加入下列试剂):
试剂(μL) | 测定管 | 对照管 |
测定管待测液 | 40 | |
对照管待测液 | | 40 |
混合试剂 | 160 | 160 |
混匀,40℃保温 30 min 后,于 505nm 波长处读取吸光度。测定管和对照管吸光值分别记为 A 测定和 A对照。ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。 |
麦芽糖含量计算:
标准条件下测定回归方程为y= 2.8944x +0.0052 ;R²= 0.9997;为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值差值。
麦芽糖(mg/g鲜重)=(ΔA-0.0052)÷2.8944×V总÷W=0.3455×(ΔA-0.0052)÷WV总:加入提取液体积,1 mL;W:样本质量,g