硫代葡萄糖苷含量检测试剂盒 ; 50T/24S
测定意义:
硫代葡萄糖苷(Glucosinolates),简称硫苷,是十字花科蔬菜中的一种重要的次生代谢产物,根据侧链基团的不同,可以把硫苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。
测定原理:
硫葡糖苷酶催化硫代葡萄糖苷反应产生葡萄糖。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
天平、研钵、离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加入1.5mL试剂二溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存。
试剂二:液体 5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体 20mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 20mL×1瓶,4℃避光保存。
样本处理:
样本烘干粉碎,过100目筛。称0.1g样本,加入1mL蒸馏水,100℃水浴提取 60min。冷却至室温,10000g 4℃离心10min,取上清待测。
测定操作:
对照管
测定管
样品(μL)
250
试剂一 (μL)
50
试剂二(μL)
950
充分混匀,37℃反应 120min
试剂三(μL)
350
试剂四(μL)
充分混匀,37℃反应 30min,吸取反应液至 1mL 玻璃比色皿,测定 505nm 处吸光光值,记为 A 对照和 A 测定,△A=A 测定-A 对照。
计算公式:
标准曲线:= 1.869x +0.0043,R²= 0.9999;x为标准品浓度:μmol/mL;y为吸光度A。
硫代葡萄糖苷含量(yμmol/g鲜重)=( A -0.0043)÷0.9345×V样÷(V样÷样总×W )△(0.0043)÷W=0.535×△A -△V样,加入样本上清体积,0.250mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g。