果糖激酶(FRK)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
蔗糖是大多数高等植物从源到库运输的主要形式, 但进入库器官后被分解为果糖和葡萄糖,果糖在进入下一步代谢前必须由果糖激酶或己糖激酶进行磷酸化，以帮助库组织的建立和库强的提高，而果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶。此外，果糖激酶还可以作为植物的己糖感受器和信号分子，通过影响植物的生长周期来调控植物的代谢和生长发育进程，果糖激酶在库组织中发挥重要的作用。因此，研究果糖激酶对研究植物中果糖代谢调节机制具有十分重要的意义。
测定原理：
FRK催化果糖合成 6-磷酸果糖，6-磷酸果糖在磷酸己糖异构酶的作用下异构为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADH，NADH在 340nm有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存
试剂一：液体 50 mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂 ×1瓶，-20℃保存；临用前加入30mL试剂一充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体 70μL×1瓶，4℃保存；临用前加入7mL试剂一充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样本处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声3s，间隔10s，重复 30次）； 8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、配好的试剂于25℃预热10min。
3、样本测定在1mL石英比色皿中依次加入加入250μL样本、500μL试剂二，125μL试剂三，125μL试剂四，混匀，立即记录340nm处30s时的吸光值 A1和5min30s后的吸光值 A2，计算Δ A=A2-A1。
注 意：
若 ΔA 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。或将反应时间缩短至 2min，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。
FRK活性计算：
1、血清(浆)FRK活性：
单位的定义：
每毫升血清(浆)在每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/mL)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T=128.6×ΔA
2、组织、细菌或细胞中FRK活性：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:
每mg组织蛋白每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力位。
FRK(nmol/min/mgprot)＝[ ΔA×V反总÷ (ε ×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=128.6×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V反总÷ (ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=128.6×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:
每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/10⁴cell)＝[ ΔA×V反总÷(ε×d×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.2572×ΔA V反总：反应体系总体积，1×10-³L；ε：
NADH摩尔消光系数，6.22×10³L / mol/cm；d：比色皿光径，1cm ；V样：加入样本体积，0.25mL；V样总：加入提取液体积，
1mL；T：反应时间，5 min ；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
