果糖激酶(FRK)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
蔗糖是大多数高等植物从源到库运输的主要形式, 但进入库器官后被分解为果糖和葡萄糖,果糖在进入下一步代谢前必须由果糖激酶或己糖激酶进行磷酸化，以帮助库组织的建立和库强的提高。果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶，还可以作为植物的己糖感受器和信号分子，通过影响植物的生长周期来调控植物的代谢和生长发育进程，在库组织中发挥重要的作用。因此，研究果糖激酶对研究植物中果糖代谢调节机制具有十分重要的意义。
测定原理：
FRK催化果糖合成 6-磷酸果糖，6-磷酸果糖在磷酸己糖异构酶的作用下异构为 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADH，NADH 在340nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 25mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂 ×1瓶，-20℃保存；临用前加入12mL试剂一充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入3mL试剂一充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体 30μL×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL试剂一充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为500~1000：1的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声3s，间隔 10s，重复30次）； 8000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、 血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm。
2、配好的试剂于25℃预热10min。
3、样本测定在96孔板中依次加入加入50μL样本、100μL试剂二，25μL试剂三，25μL试剂四，混匀，立即记录340nm处30s 时的吸光值 A1和 5min30s后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
注 意：
若 ΔA 大于0.5，需将酶液用提取液稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。或将反应时间缩短至2min，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。
FRK活性计算：
1、血清(浆)FRK活性：
单位的定义：
每毫升血清(浆)每分钟生成1nmol的 NADH定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/mL)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T=257.2×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 FRK活性：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=257.2×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/g鲜重)＝[ ΔA×V反总÷(ε ×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=257.2×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:
每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FRK(nmol/min/10⁴cell)＝[ΔA×V反总÷(ε ×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.5144×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10-⁴L；
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm ；V 样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取
液体积，1mL；T：反应时间，5min ；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万 。
