血锌浓度检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义:
锌是必需的微量元素之一,在胰岛素和卟啉代谢中也起重要作用。
测定原理:
在 pH 8.5~9.5的溶液中,Zn²⁺与锌试剂生成蓝色配位化合物,在620nm有最大吸收峰。
自备的仪器和用品:
离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水和无水乙醇。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 20mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前1天配制,加入15 mL无水乙醇充分溶解,盖紧,过夜待用。4℃保存可稳定约1个月,如颜色变黄,则已失效。
标准液:液体 1mL×1支,10μmol/L Zn²⁺标准液。4℃保存。
测定操作:
1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到620 nm,蒸馏水调零。
2、标准液解冻:提前取出标准液,置于室温下充分解冻后混匀。
3、空白管:取1.5mL EP管,依次加入100μL蒸馏水,100μL试剂一,混匀;室温,13000g,离心10min,小心吸取上清液100μL,加入0.5 mLEP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620nm
测定吸光度,记为A空白管。
4、标准管:取1.5 mLEP管,依次加入100μL标准液, 100μL试剂一,混匀;室温,13000g ,离心10min,小心吸取上清液100μL,加入0.5 mLEP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm测定吸光度,记为A标准管。
5、测定管:取1.5 mLEP管,依次加入100μL 血清,200μL试剂一,混匀;室温,8000g,离心10min,小心吸取上清液100μL,加入0.5mLEP 管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620nm测定吸光度,记为A测定管。
注 意:空白管和标准管只需测定一次。
血锌浓度计算公式:
血锌浓度(μmol/ L)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]= 10×(A 测定管-A 空白管)÷(A标准管-A空白管)C标准
液:10μmol/L Zn²⁺;
注意事项:
1、试剂三需提前一天配制,如变黄色则不能再使用。
2、加入试剂三混匀后,要在30 min内完成测定。
3、最低检出限为 1μmol/L。