血清铁浓度检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义:
血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁,该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。
测定原理:
亚硫酸钠还原血清 Fe3+生成成 Fe²⁺ ,Fe²⁺进一步与 2, 2’- 联吡啶显色,在520nm 处有吸收峰,测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
自备的仪器和用品:
离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前配制,加入15mL蒸馏水充分溶解。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前配制,加入469μL冰醋酸,加入15 mL蒸馏水充分溶解。
标准液:液体 1mL×1支(EP 管),100μmol/L Fe³⁺标准液,4℃保存。
测定:
1、分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到520nm,蒸馏水调零。
2、标准液解冻:提前取出标准液,置于室温下充分解冻后混匀。
3、空白管:取EP管,依次加入125 μL蒸馏水,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧,置于沸水浴5min,自来水冷却。加入62μL氯仿(自备),充分震荡混匀;室温 10000rpm ,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于 520 nm测定吸光度,记为A空白管。
4、标准管:取EP管,依次加入125μL标准液,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧,置于沸水浴5min, 自来水冷却。加入62μL氯仿,充分震荡混匀;室温10000rpm,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520nm测定吸光度,记为A标准管。
5、测定管:取EP管,依次加入125μL 血清,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧,置于沸水浴5min , 自来水冷却。加入62μL氯仿,充分震荡混匀;室温10000rpm ,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520 nm测定吸光度,记为A测定管。
注 意:空白管和标准管只需测定一次。
血清铁浓度计算公式:
血清铁含量(μmol /dL)= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总= 10×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) C标准:100μmol/L Fe³⁺标准液;V总:标准液总体积1mL;1dL=0.1L。
注意事项:
1、血清铁含量少,所用器皿(EP管)需要注意,避免被铁污染。
2、试剂一和试剂二溶液不稳定,需现配现用,新配制的试剂当天使用完毕。
3、最低检出限为1μmol/L。