线粒体呼吸链复合体Ⅲ/CoQ细胞色素C还原酶检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
线粒体复合体Ⅲ（EC 1.10.2.2 ）又称 CoQ-细胞色素C还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C ，生成还原型细胞色素C。
测定原理：
与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体 20mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 1.5mL×1瓶，-20℃保存；
试剂四：液体 20mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；
试剂六：液体 2.5mL×1瓶，-20℃保存。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆600g，4℃离心5min。
3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心10min。
4、上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ(此步可选做)。
5、步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声3s，间隔10秒，重复 30次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 工作液的配制：将试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
(2) 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、25μL试剂六和200μL工作液，立即混匀，记录550nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算 ΔA=A2-A1。
复合体Ⅲ活力单位的计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V样)÷T=615×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=124×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:
每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min /10⁴cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.248×ΔAV反总：反应体系总体积，2.35×
10-⁴L；ε ：细胞色素 C 摩尔消光系数，1.91×10⁴L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总:加入
提取液体积，0.202mL；T:反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W:样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=1230×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=248×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义:
每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/10⁴cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.496×ΔAV反总：反应体系总体积，2.35×
10-⁴L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×10⁴L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加
入提取液体积，0.202mL；T:反应时间，2min；Cpr:样本蛋白质浓度，mg/mL；W:样本质量，g；500:细菌或细胞总数，500万。
