肉桂酸-4-羟化酶(C4H)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
C4H又称反式肉桂酸-4-单氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌类中，该酶催化肉桂酸羟化作用产生4-香豆酸盐，是苯丙烷途径中继L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二个关键酶。
测定原理：
C4H催化肉桂酸和NADP生成 4-香豆酸盐和NADPH，在340nm下测定NADPH生成速率，即可反映C4H活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体 25 mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2瓶，-20℃保存；
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声3s，间隔10s，重复 30次）； 8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 取试剂二一瓶，加入10mL试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后24h内用完）；
(2) 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL试剂二，混匀，立即记录 340nm处初始吸光值A1和5min后的吸光值A2，计算 ΔA=A2-A1。
C4H活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
C4H（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=643×ΔA÷Cpr。
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
C4H(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=643× ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
C4H(nmol/min/10⁴cell)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=1.286×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10-⁴L；ε
：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液
体积，1 mL；T：反应时间，5 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的 NADPH定义为一个酶活力单位。
C4H(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T=1286×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：
每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
C4H(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V反总÷(ε×d×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=1286× ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：
每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
C4H(nmol/min/10⁴cell)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T=2.572×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10-⁴L；ε
：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取
液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
