植物原花青素(OPC)检测试剂盒 ; 100T/48S
测定意义:
原花青素(Oligomeric Proantho Cyanidins ,OPC)是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物,广泛存在于植物的各种器官中,具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用,广泛的应用于医药,食品,化妆品,保健品行业。
测定原理:
在酸性条件下,植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应,产生有色化合物,在500nm处有特征吸收峰,测定500nm光吸收值,可计算植物中原花青素的含量。
需自备的仪器和用品:
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。
试剂组成和配制:
提取液:60%乙醇,自备,4℃保存。(60mL无水乙醇溶于40mL蒸馏水);
试剂一:8%盐酸10mL,自备,4℃保存。(800μL盐酸溶于9.2mL甲醇);
试剂二:粉剂 0.05g×1瓶,4℃避光保存,临用前加5mL甲醇溶解;
测定工作液:临用前按照用量将试剂一和试剂二按照 1:1 混合。
空白工作液:临用前按照用量将试剂一和甲醇按照 1:1 混合
OPC提取:
称取约0.1g 样本,加入2mL提取液,匀浆后,60℃振荡提取2h,10000g,25℃, 离心 10min,取上清待测。
测定操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至500nm,蒸馏水调零。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
样品(μL) | 40 | 40 |
测定工作液(μL) | | 160 |
空白工作液(μL) | 160 | |
混匀,30℃水浴 30min,于微量石英比色皿/96 孔板中检测 500nm 处吸光值,ΔA=A 测定-A对照,每个测定管设一个对照管。 |
OPC计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0194x+0.0006 ,R²=0.999
OPC含量(mg/g鲜重)= (ΔA-0.0006)÷0.0194 ×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3 = 0.515×(ΔA-0.0006)÷W
V 样总:加入提取液体积,2mL;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样品体积0.04mL;W:样品质量,g
b. 用96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0097x+0.0006 ,R2=0.999
OPC含量(mg/g鲜重)= (ΔA-0.0006)÷0.0097×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3=1.03×(ΔA-0.0006)÷W
V样总:加入提取液体积,2mL;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样品体积,0.04mL;W:样品质量,g。
注意事项:
1、配制好的试剂二应尽快使用,4℃保存时间不超过一个月。
2、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。