植物原花青素(OPC)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义:
原花青素(Oligomeric Proantho Cyanidins ,OPC)是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物,广泛存在于植物的各种器官中,具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用,广泛的应用于医药,食品,化妆品,保健品行业。
测定原理:
在酸性条件下,植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应,产生有色化合物,在500nm处有特征吸收峰,测定500nm光吸收值可计算原花青素的含量。
需自备的仪器和用品:
天平、常温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。
试剂组成和配制:
提取液:60%乙醇,自备,4℃保存。(30mL无水乙醇溶于20mL蒸馏水);
试剂一:8%盐酸20mL,自备,4℃保存。(1.6mL盐酸溶于18.4mL甲醇);
试剂二:粉剂 0.125g×1瓶,4℃避光保存,临用前加12.5mL甲醇溶解;
测定工作液:临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。
空白工作液:临用前按照用量将试剂一和甲醇按照1:1混合。
OPC提取:
称取约0.1g样本,加入2mL提取液,匀浆后,60℃振荡提取2h,10000g,25℃, 离心 10min,取上清待测。
测定操作表:
| 对照管 | 测定管 |
样品(μL) | 200 | 200 |
测定工作液(μL) | | 800 |
空白工作液(μL) | 800 | |
混匀,30℃水浴 30min , 1mL 玻璃比色皿,于 500nm 处蒸馏水调零,测定各管吸光值,计算 A=A 测定管-A 对照管,每个测定管设一个对照管 |
OPC计算公式:
标准曲线:y=0.0194x+0.0006 ,R2=0.999
OPC含量(mg /g鲜重)=(ΔA-0.0006)÷0.0194×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3= 0.515×(ΔA -0.0006)÷WV样总:加入提取液体积,2mL;V反总:反应总体积,1mL;V样:反应中样品体积0.2mL;W:样品质量,g。
注意事项:
1、配制好的试剂二应尽快使用,4℃保存时间不超过一个月。
2、吸光度变化应该控制在 0.05~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变
3、最低检出限为10μg/g。