二氢黄酮醇还原酶(DFR)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。
测定原理：
二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在 500nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯、浓盐酸。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体 12mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体 1.5mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存，临用前加2mL蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加入30mL浓盐酸溶解待用；用不完的试剂4℃ 避光保存
酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
酶液(μL） | 40 | 40 |
试剂一 (μL） | 120 | 120 |
试剂二(μL) | | 20 |
试剂三(μL） | 20 | 20 |
混匀，30℃反应 30min |
乙酸乙酯(μL） | 200 | 200 |
37℃震荡 10min，取上层溶液，N2 吹干 |
无水乙醇(μL） | 100 | 100 |
充分震荡 |
试剂四( μL) | 300 | 300 |
混匀，25℃静置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 500nm 处吸光值 A。分别记为 A 对照管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管 |
酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0184x+0.0002 ，R²=0.999
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在30℃, pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位
DFR活性(mmol/min/mg prot)= (△A-0.0002)÷0.0184×V反总÷(V样×Cpr)÷T÷2= 9.06 ×(△A-0.0002)÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义：
在 30℃, pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/g鲜重)=(△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×W÷V样总)÷T÷2 = 9.06×(△A-0.0002)÷WV 反总：反应总
体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质
量，g；T：反应时间，30min。
b. 用96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0092x+0.0002 ，R²=0.999
(1) 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在 30℃, pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0092×V反总÷(V样×Cpr)÷T÷2 = 9.06 ×(△A-0.0002)÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活性定义：
在 30℃, pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性(mmol/min/g鲜重)=(△A-0.0002)÷0.0092×V反总÷(V样×W÷V样总）÷T÷2=9.06×(△A-0.0002)÷WV反总：反应总体
积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质
量，g；T：反应时间，30min。
