上海源桔生物人三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒检测原理

一、核心方法：竞争抑制型固相ELISA(主流)

T3属于小分子半抗原(单表位、分子量小，无法使用双抗体夹心法)，所有商业化人T3(TT3总三碘甲状腺原氨酸)ELISA全部采用竞争结合免疫酶联技术，显色吸光度与样本T3浓度呈负相关。

1.基础免疫生化逻辑微孔板固相预先包被特异性抗人T3单/多克隆抗体，抗体上结合位点总量固定有限；

体系内同时存在两种抗原：

1)待测样本内源T3；

2)HRP辣根过氧化物酶标记的T3标准抗原(酶标T3)；

血清中99%以上T3与甲状腺结合球蛋白TBG、白蛋白结合，无法自由参与竞争；试剂盒配套解离剂/剥离液，破坏蛋白-T3疏水结合键，释放全部游离T3，保证检测总T3(TT3)，游离T3(FT3)试剂盒采用封闭TBG的特殊缓冲液，不解离结合态T3。

竞争孵育

标准品/预处理样本+HRP-T3酶结合物加入包被抗T3抗体微孔；37℃恒温孵育，抗原与抗体发生可逆特异性免疫结合，达到竞争平衡。

洗板分离

洗涤液洗去未结合的游离T3、未结合酶标T3，仅保留固相“抗体-T3/抗体-HRP-T3”免疫复合物。

酶促显色生化反应(HRP催化底物显色，定量基础)底物显色体系(TMB底物，通用)加入TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)显色液，固相上结合的HRP(辣根过氧化物酶)催化底物氧化：{TMB+H2O2->氧化型TMB(蓝色可溶性产物)+H2O)反应产物为蓝色，颜色深浅与结合在板上的HRP酶量成正比。

终止反应

加硫酸终止液，酸性环境下氧化TMB质子化，蓝色稳定转为黄色，终止酶催化反应，稳定吸光度值。

定量检测

酶标仪读取450nm波长吸光度(OD值)；以系列标准品浓度与对应OD值绘制标准曲线，代入样本OD即可计算样本T3浓度。

二、两种主流试剂盒工艺细分原理类型1：

直接竞争法(最常用科研TT3试剂盒)

固相：微孔板预包被抗T3特异性抗体

竞争物：HRP直接偶联T3小分子(酶标抗原)

流程：样本+酶标T3共孵育竞争结合→洗板→TMB显色→终止读数

特点：体系简单、成本低，绝大多数人T3ELISA采用该方案

类型2：生物素-亲和素放大竞争法(高灵敏试剂盒)

固相板包被链霉亲和素(Streptavidin)

竞争体系：样本内源T3+生物素标记T3(Biotin-T3)竞争游离抗T3抗体，孵育后洗涤，加入HRP标记亲和素，与固相生物素-T3复合物特异性结合，TMB显色读数；生物素-亲和素高亲和力放大信号，灵敏度更高，适合低浓度FT3检测。

三、关键生化特性说明

特异性基础：抗T3抗体仅识别T3碘代酪氨酸特征结构，与T4、TSH、甲状腺结合球蛋白交叉反应极低，保证检测特异性；

定量关系：OD450∝结合HRP量∝结合酶标T3量∝样本T3浓度负相关；

检测区分：

总T3(TT3)试剂盒：含解离试剂，全部T3释放参与竞争；游离T3(FT3)试剂盒：缓冲液封闭TBG结合位点，仅游离微量T3参与反应，不破坏蛋白结合态；

检测样本：人血清、血浆、细胞上清、组织匀浆均可检测。

四、简易原理总结

利用小分子抗原竞争免疫结合，样本T3与HRP标记T3抢夺固相抗体位点；结合的HRP催化TMB底物产生黄色显色，吸光度与样本T3含量成反比，通过标准曲线实现T3定量检测。

源桔生物是一家集科研、生产、销售为一体的生物高新技术企业，以科研试剂生产、诊断试剂原料供应为核心，致力于为全球来自高等院校、政府研究机构、诊断试剂生产厂家以及生物公司的广大客户们提供高质量生物产品。