上海源桔生物大鼠整合素αM(CD11b/ITGAM)ELISA试剂盒样本解冻与检测前注意事项

样品采集、预处理与保存规范CD11b属于膜整合蛋白，易被蛋白酶降解；严禁溶血、反复冻融；所有操作全程冰上进行。

适用样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液(试剂盒不推荐单纯细胞上清，上清可溶性CD11b含量极低)

一、各类样本采集与预处理

1. 血清样本

大鼠腹主动脉/眼眶静脉取全血，不加抗凝剂；室温静置2h或4℃静置过夜充分凝血；4℃，1000×g离心20min，小心吸取上层淡黄色血清；

禁忌：溶血样本直接废弃(血红蛋白干扰HRP显色，造成结果失真)；不要吸取中间白细胞层。

2. 血浆样本(优先推荐EDTA抗凝)

采血管选用EDTA-Na₂/肝素钠抗凝；柠檬酸钠抗凝血浆多数厂家试剂盒未验证，慎用！采血后轻柔颠倒混匀，30min内完成离心；4℃，1000×g离心15min，吸取上清血浆；

补充提示：血浆基质存在干扰，部分说明书建议检测前2倍稀释。

3. 组织匀浆(检测组织内CD11b蛋白，最常用)

大鼠处死后迅速取材，预冷0.01MPBS(pH7.4)冲洗组织，彻底洗去残血；称重、剪碎；组织(g):预冷PBS=1:9；强烈建议PBS中添加蛋白酶抑制剂混合物(PMSF+抑肽酶等)，防止CD11b降解；冰上玻璃匀浆器充分研磨，可选超声破碎；4℃，5000×g离心5～10min，取上清待测；沉淀丢弃。

二、样品保存条件

短期检测(≤7天)：处理好的上清密封，2～8℃冷藏；中长期保存：按单次实验用量分装至EP管(避免反复冻融！)-20℃：建议1个月内完成检测-80℃：最长可保存6个月，反复冻融将造成膜蛋白降解，CD11b浓度显著偏低！

三、样本解冻与检测前注意事项

冻存样本4℃缓慢解冻，禁止室温快速融化、水浴高温解冻；解冻后轻柔颠倒混匀，禁止剧烈震荡、产生大量泡沫；若样本浑浊、存在沉淀，4℃再次离心取上清；样本中请勿添加叠氮钠(NaN₃)，抑制HRP酶活性，引起假阴性。

四、关键风险提示

CD11b主要表达于巨噬细胞、中性粒、小胶质细胞膜上；组织匀浆若红细胞裂解，大量胞内杂质干扰结果；采血、取材操作尽量快速，离体后蛋白降解速度快；若数值低于检测下限，优先排查：是否溶血、有无蛋白酶抑制剂、是否多次冻融；最终实验以你购买试剂盒原厂说明书为最高标准。

上海源桔生物是一家集科研、生产、销售为一体的生物高新技术企业，以科研试剂生产、诊断试剂原料供应为核心，致力于为全球来自高等院校、政府研究机构、诊断试剂生产厂家以及生物公司的广大客户们提供高质量生物产品。